利用Cre-loxP系統(tǒng)的一個marker-free植物表達載體的構(gòu)建.pdf

1、轉(zhuǎn)基因技術(shù)可將具有優(yōu)良性狀的目的基因?qū)胧荏w植物基因組中，從而使得許多植物的遺傳性狀得到改良。隨著植物生物技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因技術(shù)以其巨大的應(yīng)用價值，正逐步成為非常重要的育種手段。但是由于在轉(zhuǎn)化過程中往往只有少數(shù)植物細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，吸收并將外源DNA整合到受體植物基因組中，由于大多數(shù)細胞并未發(fā)生轉(zhuǎn)化，因此非常有必要用標記基因來篩選含。目的基因的轉(zhuǎn)化體。這些轉(zhuǎn)化后的受體植物因有特定的選擇性標記，可以方便的得以識別和鑒定。然而一但獲得轉(zhuǎn)化植物，

2、標記基因就變得不再有用，但卻長期存在于植物體內(nèi)并發(fā)生表達。由于人們曰益關(guān)心轉(zhuǎn)基因植物中標記基因的安全性問題，這些問題包括：(1)對植物的生長、發(fā)育、分化帶來的負面影響；(2)許多選擇標記基因尚不確定是否會對環(huán)境中其它植物產(chǎn)生影響及對人類產(chǎn)生毒性和過敏；(3)重復(fù)多個基因轉(zhuǎn)化以增加優(yōu)良性狀轉(zhuǎn)基因數(shù)目時若使用相同的標記基因?qū)⑹掷щy。為了解決這些問題，近年來已有報道通過許多方法來獲得無標記的轉(zhuǎn)基因植物。這種無標記的轉(zhuǎn)基因技術(shù)最終將去除轉(zhuǎn)化體

3、中的標記基因序列。因此無標記基因的轉(zhuǎn)化技術(shù)已越來越多的受到人們的關(guān)注。由于具有時間、組織和位點特異性，Cre重組酶介導(dǎo)的DNA重組已成為獲得無標記轉(zhuǎn)基因植物的一個重要工具。Cre/loxP位點特異性重組系統(tǒng)來源于噬菌體P1，由兩部分組成：重組酶Cre和它的識別位點loxP。Cre重組酶介導(dǎo)重組事件導(dǎo)致兩個相鄰的同向loxP位點之間的DNA片段被刪除。 本實驗利用植物表達載體pRAL-MCS構(gòu)建一個新型實用的可選擇性去除標記基因的