利用精子載體法制備轉(zhuǎn)基因小鼠疾病模型的初步研究.pdf

1、精子介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移是以精子為載體，在受精時將外源目的基因?qū)肼涯讣?xì)胞，是目前轉(zhuǎn)基因動物研究中簡單而高效的方法學(xué)之一。本研究以ICR小白鼠為試驗動物，用精子載體法制備轉(zhuǎn)基因小鼠模型，并根據(jù)得到的結(jié)果分析討論精子載體法制備轉(zhuǎn)基因動物的可行性及優(yōu)缺點。 本文進(jìn)行了如下研究：外源DNA轉(zhuǎn)染小鼠精子的研究：利用DIG末端標(biāo)記技術(shù)和免疫組化技術(shù)研究小鼠精子轉(zhuǎn)染外源DNA的效率。試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同小鼠個體精子轉(zhuǎn)染陽性率有明顯差異，平均為13％左

2、右。小鼠精子具有自發(fā)結(jié)合外源DNA能力，結(jié)合部位集中在精子頂體后軀，結(jié)合的外源DNA首先“掛”在精子膜表面，繼而被內(nèi)化轉(zhuǎn)運到細(xì)胞內(nèi)，但并非所有的結(jié)合DNA都被內(nèi)化。 精子介導(dǎo)法制備轉(zhuǎn)基因小鼠的試驗研究：利用考馬斯亮藍(lán)染色技術(shù)評價小鼠精子頂體反應(yīng)發(fā)生的情況，選擇合適的體外受精液。利用小鼠體外受精技術(shù)，將體外轉(zhuǎn)染GFP并獲能的小鼠精子對成熟卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精，受精卵進(jìn)行體外培養(yǎng)，熒光顯微鏡下觀察胚胎，結(jié)果表達(dá)GFP的陽性率為4.7