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1、利用本課題組合成的陽離子類脂,加入不同助劑制備陽離子脂質(zhì)體。分析其與質(zhì)粒的結(jié)合能力以及復(fù)合物形態(tài)。進(jìn)行細(xì)胞的體外轉(zhuǎn)染,研究轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞毒性。
采用薄層分散和超聲法制備陽離子脂質(zhì)體。瓊脂糖凝膠電泳分析陽離子脂質(zhì)體與質(zhì)粒pGFP-N2(報(bào)告基因)DNA的結(jié)合能力,原子力顯微鏡檢測(cè)復(fù)合物的形態(tài)。以商品試劑Lipofectamine2000為對(duì)照,利用脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞和HeLa細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察其基因轉(zhuǎn)染
2、效率。進(jìn)行了轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化,利用MTT法評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染試劑的毒性。原子力顯微鏡分析表明,脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物顆粒的表面不光滑,有一定的黏連性,能較規(guī)律的分散在云母片上。而殼聚糖修飾脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物顆粒的表面相對(duì)光滑。加入少量或等量DOPE,延滯DNA能力增強(qiáng),DOPE量多時(shí)反而減弱;加入蔗糖酯延滯能力變化不明顯;殼聚糖修飾的脂質(zhì)體,延滯DNA的能力明顯增強(qiáng)。加入蔗糖酯后,轉(zhuǎn)染效率下降;添加DOPE后,轉(zhuǎn)染效率升高;殼聚糖修飾的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率
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