D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽離子脂質(zhì)體的研制.pdf

1、目的：鹽酸伊立替康(CPT-11)是一種水溶性的喜樹堿類衍生物，已經(jīng)被證實對結(jié)腸腫瘤和肺泡小細胞腫瘤有較好的抗腫瘤活性。它的作用機理是依靠它內(nèi)部的共價結(jié)構(gòu)作用于拓撲異構(gòu)酶Ⅰ和DNA之間來產(chǎn)生細胞毒性作用，阻止兩條DNA單鏈的結(jié)合，使DNA與拓撲異構(gòu)酶I的復合物增加，最終導致細胞凋亡。對于所有的喜樹堿類藥物來說，這種抗腫瘤功能的發(fā)揮都依賴于結(jié)構(gòu)中內(nèi)酯環(huán)的完整性。但是在生理的pH條件下，內(nèi)酯環(huán)容易發(fā)生水解反應，生成沒有活性的羧酸類衍生物。因

2、此，包括脂質(zhì)體在內(nèi)的很多藥物載體技術(shù)都被用來保護內(nèi)酯環(huán)的穩(wěn)定性。保護其內(nèi)酯環(huán)形式是將藥物鑲嵌在脂質(zhì)體雙分子層中或者將其包封在pH值較低的內(nèi)水相中。將CPT-11包封在由硫酸銨提供的脂質(zhì)體酸性的內(nèi)水相中，有助于維持藥物的內(nèi)酯環(huán)形式。
　　 D-甘露糖是具有3，4-OH的單糖，能夠被肺泡表面的活性蛋白A和D識別。所以在制備脂質(zhì)體的同時添加D-甘露糖來修飾脂質(zhì)體，能夠使脂質(zhì)體更多的濃集在肺部，增加脂質(zhì)體的肺部靶向性。
　　 另

3、一方面，在制備脂質(zhì)體時加入一定量的十八胺除了可以調(diào)節(jié)脂質(zhì)體表面所帶電荷，使脂質(zhì)體對主藥的包封率增加，還可以防止脂質(zhì)體之間相互聚集，增加脂質(zhì)體在體外的穩(wěn)定性。
　　 基于以上原因，本試驗以CPT-11為模型藥物，在制備脂質(zhì)體時同時添加十八胺和D-甘露糖，使藥物更多的富集在肺部，減少給藥劑量，降低不良反應，提高藥物對肺部腫瘤的治療指數(shù)。
　　 方法：在查閱相關(guān)文獻的基礎(chǔ)上，初步確定D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽離子脂質(zhì)

4、體的制備方法，以包封率為主要評價指標對影響包封率的主要制備工藝和處方因素進行考察，得出了最佳的制備工藝條件和對包封率影響較大的處方因素。然后在上述單因素考察的基礎(chǔ)上，以藥物與磷脂質(zhì)量比，膽固醇和磷脂質(zhì)量比，十八胺和磷脂質(zhì)量比，D-甘露糖和磷脂質(zhì)量比作為四個影響因素進行正交試驗，每個試驗選取3個水平，按L9(34)正交表，進行試驗并進行極差分析，從而得出最佳處。
　　 對自制的D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽離子脂質(zhì)體進行了初

5、步的質(zhì)量評價和穩(wěn)定性考察。質(zhì)量評價部分包括對脂質(zhì)體的pH值、外觀、粒徑分布、形態(tài)以及體外釋放的考察。穩(wěn)定性考察主要包括對原料藥的影響因素考察，自制的D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽離子脂質(zhì)體的影響因素以及滲漏率的考察。
　　 在查閱相關(guān)文獻的基礎(chǔ)上，建立了HPLC的熒光檢測法測定CPT-11在大鼠和小鼠體內(nèi)的含量。色譜條件為：
　　 流動相：乙酸銨(0.075mol/L，加入1％的三乙胺收尾，用36％醋酸調(diào)pH值為4

6、.0)：乙腈=70:30；
　　 激發(fā)波長：375nm
　　 發(fā)射波長：530nm
　　 流速：1.0ml/min
　　 進樣量：20μl
　　 柱溫：室溫
　　 以自制的CPT-11的溶液為對照，對D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽離子脂質(zhì)體進行了大鼠和小鼠體內(nèi)藥動學研究。
　　 結(jié)果：通過制備工藝的單因素考察和處方因素的正交試驗，得出了最佳的制備工藝為加入硫酸銨體積為6ml，

7、加入硫酸銨濃度為0.2mol/L，孵育時間為45min，孵育溫度為60℃；最佳處方為磷脂200mg、膽固醇66mg、十八胺20mg、D-甘露糖20mg、主藥10mg。
　　 影響因素試驗中，CPT-11原料藥在高溫、高濕度試驗中，外觀和含量均無明顯變化。在強光照射試驗中，顏色稍有加深，但含量無明顯變化；D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽離子脂質(zhì)體在高溫和強光照射試驗中，外觀均發(fā)生了較大的變化，有少量的黃色磷脂塊狀物析出。在體外

8、釋放的考察中，D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽離子脂質(zhì)體在pH6.5的磷酸鹽緩沖液(PBS)的釋放介質(zhì)中，48h的累積釋放量小于70％。
　　 以自制的CPT-11溶液為參比制劑，自制的D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽離子脂質(zhì)體為受試制劑，SD大鼠為試驗動物，得出的AUC值分別為1.79(μg/ml)·h，36.03(μg/ml)·h。
　　 以自制的CPT-11溶液為參比制劑，自制的肺靶向鹽酸伊立替康脂質(zhì)體為受

9、試制劑，小鼠為試驗動物，進行組織分布的研究，得出的主要藥動學參數(shù)為：
　　 結(jié)論：制備的D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽離子脂質(zhì)體粒徑分布較為集中，體外釋放具有較好的緩釋性。光照和溫度對制劑的穩(wěn)定性有明顯的影響，應避光和低溫保存。在大鼠體內(nèi)試驗表明，制備的D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽離子脂質(zhì)體能夠顯著的保護藥物的活性內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)；在小鼠的體內(nèi)試驗表明，制備的D-甘露糖修飾的肺靶向鹽酸伊立替康陽離子脂質(zhì)體能夠使藥物更多的