腎透明細(xì)胞癌來源的外泌體誘導(dǎo)NK細(xì)胞功能發(fā)生缺陷的機(jī)制研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩78頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:腎透明細(xì)胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)是我國常見的泌尿系腫瘤,發(fā)病率高,早期發(fā)現(xiàn)不易。腎透明細(xì)胞癌在其發(fā)生、發(fā)展的過程中容易受到腫瘤微環(huán)境中的各種細(xì)胞的調(diào)控影響。并且當(dāng)其抗腫瘤免疫反應(yīng)發(fā)生缺陷的時(shí)候,腎透明細(xì)胞癌患者往往臨床預(yù)后不良。自然殺傷(Natural killer cells,NK)細(xì)胞是固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分,在抗腫瘤效應(yīng)中發(fā)揮了關(guān)鍵性的作用。本研究目的旨在探索NK

2、細(xì)胞在腎細(xì)胞癌中免疫應(yīng)答發(fā)生缺陷的機(jī)制。
  方法:
  1.從腎透明細(xì)胞癌患者和對照者中,搜集手術(shù)切除組織和外周血標(biāo)本,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測NK細(xì)胞的頻數(shù)和表型。
  2.檢測NK細(xì)胞殺傷和分泌細(xì)胞因子的功能,分析其與腎透明細(xì)胞癌進(jìn)展的關(guān)系。
  3.培養(yǎng)腫瘤組織、癌旁組織及良性腫瘤旁組織原代細(xì)胞,將各組原代細(xì)胞與正常NK細(xì)胞在transwell小室上進(jìn)行共孵育,判斷腫瘤細(xì)胞與NK細(xì)胞細(xì)胞間通訊方式。提取細(xì)胞外泌

3、體,進(jìn)行電鏡、WB、外泌體粒徑分布檢測,同時(shí)分析其與腎透明細(xì)胞癌進(jìn)展的關(guān)系。將提取的外泌體與NK共孵育測NK細(xì)胞的功能。
  4.分別提取腎癌腫瘤細(xì)胞系786-O、正常腎臟上皮細(xì)胞HK-2系培養(yǎng)上清中外泌體(exosome),并將提取的exosome與NK細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)。使用ELISA檢測細(xì)胞上清外環(huán)境細(xì)胞因子分泌情況,同時(shí)將786-O敲減TGF-β1后提取的exosome與NK細(xì)胞共孵育,檢測NK細(xì)胞的殺傷功能,并使用WB檢測T

4、GF-β下游信號通路,分析腎透明細(xì)胞癌來源的外泌體誘導(dǎo)NK細(xì)胞功能失調(diào)的機(jī)制。
  結(jié)果:
  1.我們發(fā)現(xiàn)腎透明細(xì)胞癌組織中浸潤的NK細(xì)胞頻數(shù)較癌旁組織明顯較少,較非癌組織較多。而外周血中 NK細(xì)胞比例并無明顯差異。表型檢測發(fā)現(xiàn),腫瘤浸潤的NK細(xì)胞活化性受體表達(dá)減少,抑制性受體表達(dá)增多,呈抑制性表型。
  2.進(jìn)一步檢測NK細(xì)胞的功能,我們發(fā)現(xiàn)腫瘤浸潤的NK細(xì)胞殺傷和分泌細(xì)胞因子的功能發(fā)生缺陷。比較不同腫瘤分期NK分

5、泌及殺傷功能,隨著患者腫瘤惡性程度增加,NK細(xì)胞的分泌及殺傷功能下降程度增加。
  3.我們培養(yǎng)原代腫瘤細(xì)胞,通過transwell共培養(yǎng)體系我們發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞主要通過外泌體作用的方式抑制 NK細(xì)胞功能。提取鑒定原代細(xì)胞的外泌體與 NK細(xì)胞共孵育,發(fā)現(xiàn)外泌體可以抑制NK細(xì)胞的功能。比較不同腫瘤分期腫瘤組織分泌外泌體的情況,我們發(fā)現(xiàn)隨著患者腫瘤惡性程度增加,外泌體的分泌濃度增多。
  4.ELISA顯示腫瘤細(xì)胞微環(huán)境大量分布T

6、GF-β1,并且我們在外泌體上檢測到TGF-β1表達(dá)。通過敲減TGF-β1,我們發(fā)現(xiàn)腎透明細(xì)胞癌來源的外泌體通過TGF-β1/SMAD信號途徑作用于NK細(xì)胞,誘導(dǎo)其功能發(fā)生缺陷。
  結(jié)論:
  1.腎透明細(xì)胞癌中,腎透明細(xì)胞癌組織中浸潤的NK細(xì)胞頻數(shù)較癌旁組織明顯較少,較非癌組織較多。NK細(xì)胞呈現(xiàn)抑制性的表型。
  2.腫瘤侵潤的NK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子及殺傷功能發(fā)生明顯缺陷,并且隨著患者腫瘤惡性程度增加,NK細(xì)胞的分泌

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論