Hsa-miR-143對腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的影響及其分子機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:研究hsa-miR-143對腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株786-O的生物學(xué)功能的影響，尋找并鑒定Hsa-miR-143的靶基因，研究hsa-miR-143對腎透明細(xì)胞癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響，從而初步探討hsa-miR-143在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制。
　　方法:1、體外轉(zhuǎn)染hsa-miR-143及NC（陰性對照），48h后進(jìn)行細(xì)胞粘附實驗證實hsa-miR-143對786-O細(xì)胞粘附能力的影響;2、體外轉(zhuǎn)染hsa-miR-14

2、3及NC，48h后進(jìn)行Transwell細(xì)胞遷移實驗證實hsa-miR-143對786-O細(xì)胞遷移能力的影響;3、通過生物信息學(xué)預(yù)測軟件Targetscan等預(yù)測hsa-miR-143的潛在靶基因，Luciferase實驗驗證hsa-miR-143是否能與靶基因3'-UTR結(jié)合;4、Western Blot實驗證實hsa-miR-143對靶基因及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白的影響。
　　結(jié)果:1、轉(zhuǎn)染Hsa-miR-143后，786-O細(xì)

3、胞的粘附數(shù)為49.9±8.8，NC組的786-O細(xì)胞的粘附數(shù)為79.7±9.0，兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)2、轉(zhuǎn)染Hsa-miR-143后，786-O細(xì)胞的遷移數(shù)為71.5±9.0，NC組786-O細(xì)胞的遷移數(shù)為104.4±12.1，兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);3、將hsa-miR-143的靶基因確定為KRAS，Luciferase實驗驗證hsa-miR-143能夠與KRAS的3'-UTR結(jié)合;4、Western

4、 Blot實驗顯示，轉(zhuǎn)染hsa-miR-143后786-O細(xì)胞中的KRAS表達(dá)量下降，E-cadherin（上皮型鈣黏蛋白）表達(dá)升高，Vimentin（波形蛋白）及N-cadherin（神經(jīng)性鈣粘附蛋白）表達(dá)下降。
　　結(jié)論:在腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中，hsa-miR-143起到了抑癌基因的作用，此作用是通過抑制腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞粘附、遷移及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化實現(xiàn)的。在腎透明細(xì)胞癌中，hsa-miR-143能夠靶向調(diào)控KRAS的表達(dá)。本實