Hsa-miR-143對腎透明細胞癌發(fā)生發(fā)展的影響及其分子機制的初步研究.pdf

1、目的:研究hsa-miR-143對腎透明細胞癌細胞株786-O的生物學功能的影響，尋找并鑒定Hsa-miR-143的靶基因，研究hsa-miR-143對腎透明細胞癌上皮間質轉化的影響，從而初步探討hsa-miR-143在腎透明細胞癌發(fā)生發(fā)展中的分子機制。
　　方法:1、體外轉染hsa-miR-143及NC（陰性對照），48h后進行細胞粘附實驗證實hsa-miR-143對786-O細胞粘附能力的影響;2、體外轉染hsa-miR-14

2、3及NC，48h后進行Transwell細胞遷移實驗證實hsa-miR-143對786-O細胞遷移能力的影響;3、通過生物信息學預測軟件Targetscan等預測hsa-miR-143的潛在靶基因，Luciferase實驗驗證hsa-miR-143是否能與靶基因3'-UTR結合;4、Western Blot實驗證實hsa-miR-143對靶基因及上皮間質轉化相關蛋白的影響。
　　結果:1、轉染Hsa-miR-143后，786-O細

3、胞的粘附數(shù)為49.9±8.8，NC組的786-O細胞的粘附數(shù)為79.7±9.0，兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)2、轉染Hsa-miR-143后，786-O細胞的遷移數(shù)為71.5±9.0，NC組786-O細胞的遷移數(shù)為104.4±12.1，兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);3、將hsa-miR-143的靶基因確定為KRAS，Luciferase實驗驗證hsa-miR-143能夠與KRAS的3'-UTR結合;4、Western

4、 Blot實驗顯示，轉染hsa-miR-143后786-O細胞中的KRAS表達量下降，E-cadherin（上皮型鈣黏蛋白）表達升高，Vimentin（波形蛋白）及N-cadherin（神經(jīng)性鈣粘附蛋白）表達下降。
　　結論:在腎透明細胞癌的發(fā)生發(fā)展中，hsa-miR-143起到了抑癌基因的作用，此作用是通過抑制腎透明細胞癌細胞粘附、遷移及上皮間質轉化實現(xiàn)的。在腎透明細胞癌中，hsa-miR-143能夠靶向調控KRAS的表達。本實