RNA干擾Jagged1基因?qū)δI透明細(xì)胞癌細(xì)胞的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：（1）探討Jagged1、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3蛋白在腎透明細(xì)胞癌臨床的意義。（2）觀察干擾沉默Jagged1基因后腎透明細(xì)胞癌786-O細(xì)胞株細(xì)胞生物學(xué)的變化及對(duì)Akt/mTOR信號(hào)通路的影響。
　　方法：（1）免疫組化檢測(cè)Jagged1、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3蛋白在52例腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本、癌旁組織及30例正常腎組織中的表達(dá)。（2）使用脂質(zhì)體將Jagged1基因的SiRNA片段轉(zhuǎn)染786

2、-O細(xì)胞，RT-PCR及Western Blot的方法檢測(cè)Jagged1基因mRNA和蛋白。（3）應(yīng)用MTT觀察Jagged1基因干擾沉默后腎透明細(xì)胞癌786-O細(xì)胞生長增殖情況；TUNEL檢測(cè)786-O細(xì)胞凋亡率的變化。（4)Western Blot檢測(cè)Jagged1基因干擾沉默凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、procaspase-3及Akt/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白 Akt、p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的表達(dá)變化。

3、r>　　結(jié)果：（1）Jagged1、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3蛋白在腎透明細(xì)胞癌中的陽性率高于在癌旁組織和正常腎組織中的陽性率，腎透明細(xì)胞癌Jagged1、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3蛋白的表達(dá)與患者年齡、性別無關(guān)(P>0.05)，而與腎癌細(xì)胞Fuhrman分級(jí)、腫瘤大小及 TNM分期相關(guān)(p＜0.05)。（2）Jagged1 siRNA沉默Jagged1 mRNA和蛋白的表達(dá)。（3）干擾Jagged1基因后腎

4、透明細(xì)胞癌786-O細(xì)胞增殖受到抑制，Jagged1 siRNA下調(diào)抑制凋亡基因BCL-2，上調(diào)Bax表達(dá)增強(qiáng)，啟動(dòng)效益蛋白Procaspase-3，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。（4）干擾Notch1基因可下調(diào)腎透明細(xì)胞癌786-O細(xì)胞p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的表達(dá)。
　　結(jié)論：Jagged1、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3蛋白在腎透明細(xì)胞癌中有異常高表達(dá)，均與腎癌細(xì)胞Fuhrman分級(jí)、腫瘤大小及TNM分期相關(guān)，J