子宮內(nèi)膜異位癥卵巢顆粒細(xì)胞SF-1的表達(dá)及其啟動子甲基化的研究.pdf

1、第一部子宮內(nèi)膜異位癥對體外受精—胚胎移植治療臨床結(jié)果的影響
　　目的:回顧性比較分析子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)合并不孕和對照組（單純輸卵管因素性不孕）行體外受精—胚胎移植(IVF-ET)治療的臨床數(shù)據(jù)，探討EMs對于IVF-ET治療結(jié)局的影響。
　　方法:選取107例腹腔鏡診斷EMs的不孕女性（其中58例為Ⅰ、Ⅱ期EMs，49例為Ⅲ、Ⅳ期EMs）和121例對照組女性納入研究，比較兩組一般情況及IVF-ET治療結(jié)局相關(guān)指標(biāo)。

2、r>　　結(jié)果:(1) EMs和對照組兩組患者的年齡、不孕年數(shù)、體重指數(shù)、基礎(chǔ)FSH值、HCG日E2水平和移植日子宮內(nèi)膜厚度和移植胚胎數(shù)進(jìn)行比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義;(2) EMs組FSH使用總量顯著高于對照組(P＜0.05);(3)兩組患者的獲卵數(shù)和受精率相比無差異，但EMs組的優(yōu)質(zhì)胚胎率(P＜0.01)和可冷凍胚胎數(shù)(P＜0.05)均顯著低于對照組，臨床妊娠率和種植率在EMs組有下降趨勢但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:EMs對于

3、IVF-ET治療的臨床結(jié)果具有不良影響。EMs致卵巢對促排卵藥物的反應(yīng)性下降，降低優(yōu)質(zhì)胚胎率和可用胚胎數(shù)，使得種植率和臨床妊娠率呈現(xiàn)下降趨勢。
　　第二部分 SF-1和LRH-1在子宮內(nèi)膜異位癥卵巢顆粒細(xì)胞中的表達(dá)
　　目的:通過測定P450芳香化酶編碼基因CYP19、CYP19 PⅡ、孤核受體家族成員類固醇生成因子-1(steroidogenic-1，SF-1)和肝受體類似物-1(liver receptorhomolog

4、-1，LRH-1)在EMs卵巢顆粒細(xì)胞中的表達(dá)及其相關(guān)性，探討SF-1和LRH-1在EMs卵巢顆粒細(xì)胞P450芳香化酶表達(dá)下降機制中的可能作用。
　　方法:選取16例腹腔鏡診斷EMs的不孕女性(其中7例為Ⅰ、Ⅱ期EMs，9例為Ⅲ、Ⅳ期EMs)和28例對照組女性納入研究。收集IVF-ET治療中的卵泡液分離純化顆粒細(xì)胞，應(yīng)用QT RT-PCR技術(shù)檢測顆粒細(xì)胞中CYP19，CYP19 PⅡ以及SF-1、LRH-1 mRNA水平并作比較和

5、相關(guān)分析。
　　結(jié)果:(1) EMs卵巢顆粒細(xì)胞中CYP19(P＜0.05)，CYP19 PⅡ(P＜0.001)以及SF-1(P＜0.05)、LRH-1(P＜0.001) mRNA的表達(dá)水平均較正常對照組降低;(2)Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示僅EMs組顆粒細(xì)胞中SF-1和LRH-1 mRNA的表達(dá)水平與CYP19 PⅡ mRNA呈正相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)。
　　結(jié)論:EMs卵巢顆粒細(xì)胞中SF-1和LRH-1在轉(zhuǎn)錄水平

6、的表達(dá)下降可部分解釋EMs性不孕卵巢反應(yīng)下降和卵子質(zhì)量受損的機制，而SF-1、LRH-1和CYP19 PⅡ在EMs顆粒細(xì)胞中的表達(dá)下降相關(guān)性是探討EMs顆粒細(xì)胞P450芳香化酶活性下降機制的初步研究。
　　第三部分子宮內(nèi)膜異位癥卵巢顆粒細(xì)胞SF-1基因啟動子甲基化狀態(tài)的研究
　　目的:通過檢測并比較EMs和正常女性卵巢顆粒細(xì)胞中SF-1基因啟動子區(qū)5'CpG位點甲基化水平探討EMs卵巢顆粒細(xì)胞中SF-1表達(dá)下降的機制。

7、>　　方法:應(yīng)用亞硫酸鹽測序即BSP克隆測序法(Bisulfite Sequencing PCR，BSP)檢測EMs和正常女性卵巢顆粒細(xì)胞SF-1基因啟動子區(qū)5'CpG位點甲基化水平，將測得的序列與原始序列比對，統(tǒng)計和比較甲基化位點、數(shù)量并分析兩組甲基化程度。
　　結(jié)果:亞硫酸鹽測序片段涵蓋SF-1基因轉(zhuǎn)錄起始位點附近的13個CpG位點(從CpG-84到CpG+168)，正常對照組顆粒細(xì)胞SF-1基因啟動子區(qū)域的CpG位點表現(xiàn)為差

8、異甲基化狀態(tài)，而EMs組SF-1基因啟動子區(qū)域的整體甲基化水平顯著高于對照組(P＜0.05)，逐個位點的分析顯示EMs組CpG+7，+18，+21，+42，+54，+60，+132以及+146位點相較于正常對照組呈現(xiàn)高甲基化水平(P＜0.05);而EMs組CpG+77，+121和+141位點的高甲基化水平尤為顯著(P＜0.001)。
　　結(jié)論: EMs卵巢顆粒細(xì)胞SF-1基因啟動子區(qū)5'CpG位點甲基化水平顯著高于對照組，尤其是+