人胃癌裸鼠腹腔移植模型的建立及Caveolin-1、HIF-1α蛋白和mRNA的表達(dá).pdf

1、目的：建立荷人胃癌MGC-803細(xì)胞裸鼠腹腔異位移植模型，探討Caveolin-1及HIF-1α蛋白在裸鼠移植胃癌組織及相關(guān)內(nèi)臟組織中的表達(dá)，為胃癌的診斷及檢測(cè)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：一、建模：1）細(xì)胞培養(yǎng)：在EPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)人胃癌 MGC-803細(xì)胞株，制備單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×107/mL，備用；2）將35只BALB/C(nu/nu)裸鼠（雄性）隨機(jī)兩組：對(duì)照組10只（注射生理鹽水，0.

2、2mL/只），實(shí)驗(yàn)組25只（注射接種MGC-803單細(xì)胞懸液，0.2mL/只）；3）觀察：觀測(cè)裸鼠生長(zhǎng)情況及成瘤情況，每隔一周用游標(biāo)卡尺測(cè)量腹腔可觀測(cè)腫瘤的長(zhǎng)徑和短徑以計(jì)算腫瘤的體積大小，并繪制其生長(zhǎng)曲線。二、檢測(cè)：1）標(biāo)本解剖：7周后麻醉處死裸鼠并開腹解剖，取對(duì)照組裸鼠胃、肝臟、肺臟，肉眼觀察實(shí)驗(yàn)組裸鼠腹腔內(nèi)成瘤情況，取腹腔內(nèi)瘤體、肝臟、肺臟、可疑結(jié)節(jié)；2）病理學(xué)診斷：標(biāo)本石蠟包埋，常規(guī)切片,行HE染色觀察；3）采用免疫組化法和 RT

3、-PCR法分別檢測(cè)上述組織中Caveolin-1、HIF-1α蛋白和mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：一、成功建立了人胃癌MGC-803細(xì)胞裸鼠腹腔異位移植模型。二、免疫組化染色顯示：1）Caveolin-1蛋白在對(duì)照組正常胃組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為80％（8/10）高于在實(shí)驗(yàn)組腹腔移植胃癌組織中表達(dá)率35%（6/23），在對(duì)照組正常肝組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為60%（6/10）高于在實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)移肝組織中陽(yáng)性表達(dá)率28%（5/23），在對(duì)照組正常肺

4、組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為70%（7/10）高于在實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)移肺組織中陽(yáng)性表達(dá)率20%（3/15），差異均存在顯著性，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）；2）HIF-1α蛋白在對(duì)照組正常胃組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為10%（1/10）低于在實(shí)驗(yàn)組腹腔移植胃癌組織中表達(dá)率78%（18/23），在對(duì)照組正常肝組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為30%（3/10）低于在實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)移肝組織中陽(yáng)性表達(dá)率65%（15/23），在對(duì)照組正常肺組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為20%（2/10）低于在實(shí)驗(yàn)

5、組轉(zhuǎn)移肺組織中陽(yáng)性表達(dá)率67%（9/15），差異均存在顯著性，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）；3）腹腔移植胃癌組織中HIF-1α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與Caveolin-1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率存在負(fù)相關(guān)性(r=-0．392，P<0．05)。三、RT-PCR檢測(cè)顯示：1） Caveolin-1 mRNA在對(duì)照組正常胃組織中的表達(dá)高于實(shí)驗(yàn)組腹腔移植胃癌組織中表達(dá)，在對(duì)照組正常肝與肺組織中的表達(dá)高于實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)移肝與轉(zhuǎn)移肺組織中表達(dá)；2）HIF-1αmRNA在

6、對(duì)照組正常胃組織中的表達(dá)低于實(shí)驗(yàn)組腹腔移植胃癌組織中表達(dá)，在對(duì)照組正常肝與肺組織中的表達(dá)低于實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)移肝與轉(zhuǎn)移肺組織中表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1.采用注射5×107/mL濃度人胃癌細(xì)胞株MGC-803建造裸鼠腹腔異位移植模型具有高成瘤率及高轉(zhuǎn)移率的特點(diǎn)，可為胃癌的腹腔種植轉(zhuǎn)移治療等研究提供一個(gè)理想的動(dòng)物模型。
　　2.Caveolin-1和HIF-1α基因可能成為驗(yàn)證胃癌發(fā)生的生物標(biāo)記物和評(píng)估胃癌患者肝肺侵襲轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)