人胃癌裸鼠腹腔移植模型的建立及Caveolin-1、HIF-1α蛋白和mRNA的表達.pdf

1、目的：建立荷人胃癌MGC-803細胞裸鼠腹腔異位移植模型，探討Caveolin-1及HIF-1α蛋白在裸鼠移植胃癌組織及相關內(nèi)臟組織中的表達，為胃癌的診斷及檢測遠處轉移提供一定的實驗依據(jù)。
　　方法：一、建模：1）細胞培養(yǎng)：在EPMI-1640細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)人胃癌 MGC-803細胞株，制備單細胞懸液，調整細胞濃度為5×107/mL，備用；2）將35只BALB/C(nu/nu)裸鼠（雄性）隨機兩組：對照組10只（注射生理鹽水，0.

2、2mL/只），實驗組25只（注射接種MGC-803單細胞懸液，0.2mL/只）；3）觀察：觀測裸鼠生長情況及成瘤情況，每隔一周用游標卡尺測量腹腔可觀測腫瘤的長徑和短徑以計算腫瘤的體積大小，并繪制其生長曲線。二、檢測：1）標本解剖：7周后麻醉處死裸鼠并開腹解剖，取對照組裸鼠胃、肝臟、肺臟，肉眼觀察實驗組裸鼠腹腔內(nèi)成瘤情況，取腹腔內(nèi)瘤體、肝臟、肺臟、可疑結節(jié)；2）病理學診斷：標本石蠟包埋，常規(guī)切片,行HE染色觀察；3）采用免疫組化法和 RT

3、-PCR法分別檢測上述組織中Caveolin-1、HIF-1α蛋白和mRNA的表達。
　　結果：一、成功建立了人胃癌MGC-803細胞裸鼠腹腔異位移植模型。二、免疫組化染色顯示：1）Caveolin-1蛋白在對照組正常胃組織中的陽性表達率為80％（8/10）高于在實驗組腹腔移植胃癌組織中表達率35%（6/23），在對照組正常肝組織中的陽性表達率為60%（6/10）高于在實驗組轉移肝組織中陽性表達率28%（5/23），在對照組正常肺

4、組織中的陽性表達率為70%（7/10）高于在實驗組轉移肺組織中陽性表達率20%（3/15），差異均存在顯著性，有統(tǒng)計學意義（P<0．05）；2）HIF-1α蛋白在對照組正常胃組織中的陽性表達率為10%（1/10）低于在實驗組腹腔移植胃癌組織中表達率78%（18/23），在對照組正常肝組織中的陽性表達率為30%（3/10）低于在實驗組轉移肝組織中陽性表達率65%（15/23），在對照組正常肺組織中的陽性表達率為20%（2/10）低于在實驗

5、組轉移肺組織中陽性表達率67%（9/15），差異均存在顯著性，有統(tǒng)計學意義（P<0．05）；3）腹腔移植胃癌組織中HIF-1α蛋白陽性表達率與Caveolin-1蛋白的陽性表達率存在負相關性(r=-0．392，P<0．05)。三、RT-PCR檢測顯示：1） Caveolin-1 mRNA在對照組正常胃組織中的表達高于實驗組腹腔移植胃癌組織中表達，在對照組正常肝與肺組織中的表達高于實驗組轉移肝與轉移肺組織中表達；2）HIF-1αmRNA在

6、對照組正常胃組織中的表達低于實驗組腹腔移植胃癌組織中表達，在對照組正常肝與肺組織中的表達低于實驗組轉移肝與轉移肺組織中表達。
　　結論：
　　1.采用注射5×107/mL濃度人胃癌細胞株MGC-803建造裸鼠腹腔異位移植模型具有高成瘤率及高轉移率的特點，可為胃癌的腹腔種植轉移治療等研究提供一個理想的動物模型。
　　2.Caveolin-1和HIF-1α基因可能成為驗證胃癌發(fā)生的生物標記物和評估胃癌患者肝肺侵襲轉移的風險