低濃度過氧化氫通過上調(diào)WDR26促進(jìn)心肌細(xì)胞H9c2的增殖.pdf

1、WDR26是從經(jīng)歷短暫缺血-再灌注的大鼠心肌組織中發(fā)現(xiàn)并表達(dá)上調(diào)的基因，又被命名為缺血預(yù)適應(yīng)上調(diào)基因2（myocardial ischemic preconditioning upregulated protein2，MIP2），其GenBank登錄號是 AY221751。它的最大開放閱讀框為1497bp，編碼498個氨基酸。其編碼肽鏈的C-端含5個WD40結(jié)構(gòu)域，故為典型的WD-重復(fù)蛋白。該基因被證實對缺血-再灌注引起的心肌損傷有保護(hù)

2、作用。
　　缺血預(yù)適應(yīng)、后適應(yīng)發(fā)揮內(nèi)源性心肌保護(hù)作用時，機(jī)體的活性氧產(chǎn)生也是增加的，但活性氧在其中所起的保護(hù)作用機(jī)制尚不清楚。
　　本實驗采用大鼠心室肌H9c2細(xì)胞株，運用外源性低濃度過氧化氫作用于細(xì)胞，通過不同作用時間及不同作用濃度，采用MTT比色法、流式細(xì)胞術(shù)等方法，觀察低濃度過氧化氫對細(xì)胞的增殖影響。結(jié)果顯示:低濃度的H2O2(12～50μmol/L)刺激后的細(xì)胞數(shù)目及570 nm的吸光度值增加，活細(xì)胞數(shù)目增多；細(xì)胞流

3、式術(shù)顯示低濃度過氧化氫細(xì)胞的DNA合成增加，細(xì)胞增殖明顯，說明低濃度的H2O2有明顯的促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用。結(jié)果還顯示，中等劑量的H2O2(500μmol/L)可引起H9c2細(xì)胞散在性固縮壞死及溶解壞死。說明不同劑量的過氧化氫作用于H9c2細(xì)胞，會引起明顯不同的生物學(xué)效應(yīng)。
　　我們前期實驗顯示，WDR26與心肌缺血預(yù)適應(yīng)的發(fā)生密切相關(guān)，且WDR26有抑制過氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的作用，那么活性氧促細(xì)胞增殖的機(jī)理是否與WDR26有關(guān)，

4、目前還不清楚。本實驗選擇以Western Blot和RT-PCR的方法，研究WDR26在不同濃度及不同時間的H2O2處理 H9c2心肌細(xì)胞后其表達(dá)的動態(tài)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低濃度 H2O2（12～50μM）處理后，WDR26的mRNA表達(dá)增加，于4h達(dá)高峰，然后逐步降低，24h時仍高于非處理組。WDR26蛋白質(zhì)表達(dá)水平隨著H2O2濃度的增加而升高。運用RNA干擾將WDR26基因沉默后，其促增殖作用明顯減弱。上述結(jié)果說明，低濃度的H2O2是通