20(S)-原人參三醇立體選擇性代謝排泄研究.pdf

1、20(S)-原人參三醇ocotillol型差向異構體(M1-1和M1-2)為20(S)-原人參三醇的代謝產(chǎn)物。本課題擬對20(S)-原人參三醇（PPT）進行體內(nèi)外代謝以及排泄的研究，闡述其生物利用度低的原因。進一步通過研究 PPT及其代謝產(chǎn)物 M1-1和 M1-2對CYP3A4、P-gp的作用，為藥物相互作用提供依據(jù)。
　　1、PPT在人和鼠肝微粒體及大鼠體內(nèi)的代謝研究
　　本節(jié)采用LC-MS/MS法對人肝微粒體和大鼠糞便中

2、PPT的氧化代謝產(chǎn)物進行鑒定。在人肝微粒體中發(fā)現(xiàn)12種氧化代謝產(chǎn)物，其中有8種是之前文獻未報道的。大鼠灌胃給予PPT后，在其糞便中發(fā)現(xiàn)24種氧化代謝產(chǎn)物，其中的20種（包括在人肝微粒體中發(fā)現(xiàn)的6種）是首次報道。結果表明：PPT在大鼠體內(nèi)比在人肝微粒體中發(fā)生了更廣泛的代謝，M1-1和M1-2這對差向異構體是主要的代謝產(chǎn)物，其他代謝產(chǎn)物由它們進一步代謝產(chǎn)生。酶促動力學實驗結果表明：RLM中，M1-1生成速率的Vmax是M1-2的2.4倍，M

3、1-1和M1-2的消除速率相近；HLM中，M1-1生成速率的Vmax是M1-2的10.4倍，M1-2的消除速率是M1-1消除速率的11.0倍。因此，PPT代謝的種屬差異主要是來源于M1-1和M1-2的立體選擇性生成和它們的進一步消除。P450亞型酶對M1-1和M1-2代謝的影響研究表明：CYP3A是負責M1-1、M1-2代謝的主要亞型酶。
　　采用LC-MS/MS法測定大鼠血漿中PPT、M1-1和M1-2的濃度。大鼠灌胃給予PPT

4、后的藥代動力學研究表明：PPT在1h血藥濃度達到最大值，2 h后基本消失；代謝產(chǎn)生的M1-1的Cmax明顯高于M1-2，M1-1和M1-2分別在0.5 h，0.25 h血藥濃度達到最大值。M1-1的T1/2為1.74 h，M1-2在3 h后在體內(nèi)基本消失。PPT、M1-1、M1-2的AUC(0-t)分別為192.55 h·ng/mL、894.10h·ng/mL、15.27h·ng/mL，M1-1的AUC(0-t)約為M1-2的58倍。因

5、此，我們推斷PPT在大鼠體內(nèi)迅速吸收并且消除，主要代謝為M1-1。
　　2、PPT及M1-1、M1-2在大鼠體內(nèi)的排泄特征
　　PPT在體內(nèi)主要代謝為20(S)-原人參三醇ocotillol型差向異構體（M1-1和M1-2），本文考察灌胃或靜注給予大鼠一定量PPT或M1-1、M1-2后，其在尿液、糞便和膽汁中的排泄情況。以 LC-MS/MS法測定大鼠尿液、糞便和膽汁中的 PPT、M1-1和M1-2的濃度。結果顯示，灌胃給予P

6、PT后72 h，PPT、M1-1及M1-2的糞便累積排泄量分別為給藥劑量的14.88％、1.34%、0.084%，基本不經(jīng)尿排泄；灌胃給予M1-1或M1-2后72h糞便累積排泄量分別為給藥劑量的4.41%、47.20%，基本不經(jīng)尿排泄。灌胃給予M1-1或M1-2后36 h膽汁累積排泄量分別為給藥劑量的3.01%、0.068%，靜注給藥M1-1或M1-2后36 h，其膽汁累積排泄量分別為給藥劑量的8.80%、1.24%。實驗表明，灌胃給予

7、PPT后，PPT及其代謝物M1-1、M1-2少量經(jīng)糞便排泄，基本不經(jīng)尿排泄，且M1-1和M1-2在大鼠的膽汁排泄具有立體選擇性差異。
　　3、PPT及其代謝產(chǎn)物M1-1、M1-2對CYP3A4和P-gp的作用
　　本節(jié)通過體外試驗考察了PPT及其代謝產(chǎn)物M1-1、M1-2對CYP3A4的影響。利用咪達唑侖作為特異性探針底物，通過 LC-MS/MS法測定其主要代謝產(chǎn)物1-OH咪達唑侖的量研究PPT及其代謝產(chǎn)物M1-1、M1-2

8、對CYP3A4酶介導的咪達唑侖代謝的影響。結果表明，PPT、M1-1和M1-2對1-OH咪達唑侖的生成均有抑制作用，且隨著藥物濃度的增加抑制作用增強。
　　本文建立了Caco-2細胞模型，觀察caco-2細胞間連接緊密，TEER>600Ω·cm2，熒光黃的Papp值小于5×10-7 cm/s。結果表明，本實驗室所建立的Caco-2細胞模型符合相應指標要求。
　　為了研究PPT、M1-1和M1-2對P-gp的影響，本節(jié)考察了P

9、PT、M1-1和M1-2對P-gp ATPase活性的影響；對羅丹明123在Caco-2細胞中攝取的影響；對地高辛在Caco-2細胞模型中轉運的影響；通過Western-boltting法研究其對P-gp在Caco-2細胞中表達的影響。結果表明：PPT、M1-1和M1-2均抑制基底P-gp ATPase活性以及維拉帕米誘導的P-gp ATPase活性；能增加羅丹明123在Caco-2細胞中的攝取；降低地高辛在Caco-2細胞中的外排；且