文拉法辛在中國(guó)健康人群中的立體選擇性代謝研究.pdf

1、一、目的 建立文拉法辛及其代謝產(chǎn)物氧去甲基文拉法辛的手性拆分方法，研究文拉法辛及其代謝產(chǎn)物氧去甲基文拉法辛手性異構(gòu)體的單劑量藥動(dòng)學(xué)，并初步探討文拉法辛在中國(guó)不同的CYP2D6*10等位基因型健康人群中的立體選擇性代謝機(jī)制，為深入研究文拉法辛藥動(dòng)學(xué)及其代謝機(jī)制提供參考，并為進(jìn)一步的臨床治療方案提供依據(jù)。 二、方法 招募88名漢族健康受試者，采用RFLP-PCR法進(jìn)行基因分型，篩選其中12名符合要求的受試者進(jìn)行文拉法

2、辛單劑量藥代動(dòng)力學(xué)研究。第一周期單次服用文拉法辛75mg，第二周期單次服用文拉法辛75 mg+苯海拉明25 mg，于設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)采血4 mL，經(jīng)適當(dāng)處理后測(cè)定文拉法辛及其主要代謝產(chǎn)物氧去甲基文拉法辛對(duì)映異構(gòu)體的血藥濃度。本研究實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則：隨機(jī)，對(duì)照，開放性。 1.RFLP-PCR法對(duì)健康人群CYP2D6*10等位基因進(jìn)行分型1.1 DNA提取采用經(jīng)典的酚.氯仿抽提法對(duì)人全血中的DNA進(jìn)行提取。 1.2 RFLP-PCR

3、法進(jìn)行基因分型用經(jīng)典的RFLP-PCR法對(duì)88名健康受試者的基因進(jìn)行分型，篩選出12名符合要求的受試者進(jìn)行文拉法辛單劑量藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)。 2.本部分實(shí)驗(yàn)中所涉及的測(cè)定方法 2.1 用Chirobiotie V手性柱拆分VEN與ODV手性異構(gòu)體。 2.2 HPLC-MS/MS法測(cè)定體內(nèi)VEN與ODV手性異構(gòu)體血藥濃度。 三、結(jié)果 1.VEN與ODV手性異構(gòu)體的拆分建立了VEN與ODV手性異構(gòu)體的拆分

4、方法，以92％甲醇為有機(jī)相，以30 mM的醋酸銨為水相，較好地拆分了VEN與ODV手性異構(gòu)體；VEN：分離度1.12，分離因子1.7：ODV：分離度1.18，分離因子1.6。 2.生物樣本測(cè)定用HPLC-MS/MS法測(cè)定VEN與ODV手性異構(gòu)體血藥濃度。S-VEN，R-VEN，S-ODV，R-ODV分另IJ在0.28～423.00 μg·L-1、0.28～423.00 μg·L-1、0.35～532.80μg·L-1和0.35～

5、532.80μg·L-1濃度范圍線性良好。方法回收率均在77.7％～110.7％范圍內(nèi)，日內(nèi)和日間RSD皆小于11.0％。 3.VEN與ODV手性異構(gòu)體單劑量藥代動(dòng)力學(xué)本課題首次獲得了VEN手性異構(gòu)體在中國(guó)健康人群中的單劑量藥代動(dòng)力學(xué)資料，并對(duì)VEN在不同CYP2D6*10等位基因人群中的立體選擇性代謝進(jìn)行了初步研究。所測(cè)樣本的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)如下：R-VEN與S-VEN的AUC(0-∞)分別為516.6±273.2和769.4±25

6、9.0 μg·h·L-1，Cmax分別為33.1±17.7和48.1±15.9μg·L-1，t1/2分別為11.8±4.2和8.7±1.9h，tmax分別為2.3±0.9，2.5±0.9h。R-ODV與S-ODV的AUC(0-∞)分別為913.3±265.8和868.4±336.7 μg·h·L-1，Cmax分別為40.5±18.0和50.2±24.9 μg·L-1，t1/2分別為14.4±5.6和16.6±8.3 h，tmax分別為1

7、6.6±8.3，14.4±5.6 h。S-VEN與R-VEN在AUC(0-∞)，t1/2，tmax)，Ka與Ke上存在有顯著性差異(P<0.05)，而R-ODV與S-ODV僅在t1/2，tmax與Ke上存在有顯著性差異(P<0.05)，AUC(0-∞)無(wú)差異。在Cmax值上，S-VEN>R-VEN，S-ODV>R-ODV并且兩兩之間都存在有顯著性差異(P<0.05)。 4.苯海拉明和VEN的藥物相互作用健康受試者合用苯海拉明前后

8、，R-VEN、S-VEN、R-ODV、S-ODV四個(gè)物質(zhì)的AUC(0-∞)值都有明顯的上升，主要原因是BEZ抑制了CYP2D6酶，R-VEN與S-VEN的代謝減少，其AUCmax值增加，而R-ODV與S-ODV的AUC(0-∞)值增加則是由于CYP2D6酶被部分抑制后R-ODV與S-ODV通過(guò)其二次代謝生成另一代謝產(chǎn)物DDV減少。這四個(gè)被分析物中尤以R-ODV與S-ODV的增加最為顯著(p<0.05)。進(jìn)一步將VEN與ODV手性異構(gòu)體的

9、AUC(0-∞)值進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，S-ODV的AUC/S.VEN的AUC與R-ODV的AUC/R-VEN的AUC這兩個(gè)比值在未服用BEZ時(shí)無(wú)顯著性差異，而在服用BEZ后兩者之間存在有顯著性差異(P<0.05)。 對(duì)參數(shù)Cmax進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，除S-ODV外，其余三個(gè)物質(zhì)在合用BEZ后Cmax值都增加，其中尤以S-VEN、R-ODV增加最顯著(P<0.05)。在對(duì)其它兩個(gè)重要的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)t1/2與tmax進(jìn)行分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，R-VEN與S

10、-VEN的tmax減小了，說(shuō)明兩者的達(dá)峰時(shí)間縮短了，而R-ODV與S-ODV則得到了不同的結(jié)果，S-ODV的tmax值增加，而R-ODV的tmax值減少，并且R-ODV在服用BEZ前后tmax值產(chǎn)生了顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。而參數(shù)t1/2在服用BEZ前后的改變很小，R-VEN、S-VEN的t1/2減小，而R-ODV、S-ODV的t1/2則上升，且S-ODV合用前后產(chǎn)生了顯著性差異(P<0.05)。以上幾點(diǎn)說(shuō)明CYP2D6對(duì)R-

11、VEN、S-VEN代謝生成R-ODV、S-ODV存在有選擇性。 5.CYP2D6*10對(duì)VEN與ODV手性異構(gòu)體藥動(dòng)學(xué)的影響CYP2D6*10等位基因?qū)EN手性異構(gòu)體代謝產(chǎn)生影響，雖然CYP2D6*10/*10組與CYP2D6*1/﹡1組的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著性差異，但是CYP2D6*10/*10組的Cmax與AUC要高于CYP2D6*1/﹡1組，而CYP2D6*10等位基因?qū)EN兩個(gè)旋光異構(gòu)體的代謝無(wú)區(qū)別。

12、四、結(jié)論 1. 在中國(guó)健康受試者中，VEN手性異構(gòu)體藥動(dòng)學(xué)符合一室模型且VEN與ODV手性異構(gòu)體在代謝環(huán)節(jié)上存在有較大差異。 2. 單劑量服用苯海拉明，可抑制文拉法辛的代謝，但其對(duì)S.VEN代謝的抑制作用更強(qiáng)，說(shuō)明文拉法辛代謝存在立體選擇性差異。 3. 文拉法辛與苯海拉明合用產(chǎn)生明顯的藥物動(dòng)力學(xué)相互作用，其原因是苯海拉明抑制體內(nèi)CYP2D6活性。CYP2D6活性下降后，VEN手性異構(gòu)體的峰濃度明顯增加，AUC有上

13、升趨勢(shì)，主要原因是CYP2D6活性下降，VEN手性異構(gòu)體經(jīng)CYP2D6代謝減少。因此，其Cmax與AUC都有所上升。而ODV手性異構(gòu)體Cmax與AUC值的增加可能源于ODV需要經(jīng)CYP2D6二次代謝生成另一代謝產(chǎn)物DDV，CYP2D6活性下降后，其二次代謝減少，因此這兩個(gè)參數(shù)都表現(xiàn)出上升的趨勢(shì)。 4. CYP2D6﹡10對(duì)VEN與ODV手性異構(gòu)體的代謝產(chǎn)生影響，雖然無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著性差異，但是主要原因是樣本量較小，而且本實(shí)驗(yàn)為單劑