苓甘五味姜辛湯對(duì)寒飲伏肺型哮喘大鼠cAMP-PKA通路相關(guān)分子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本課題采用寒冷刺激加卵蛋白腹腔注射和霧化吸入的方法建立寒飲伏肺型哮喘大鼠模型，觀察苓甘五味姜辛湯對(duì)寒飲伏肺型哮喘大鼠肺組織病理變化及cAMP-PKA信號(hào)通路相關(guān)基因和蛋白的影響，從而闡明苓甘五味姜辛湯治療寒飲伏肺型哮喘的作用機(jī)理。
　　方法：將90只大鼠稱重，用隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、模型組、苓甘五味姜辛湯高、中、低劑量組及西藥組，每組15只。空白組以PBS溶液代替OVA致敏和霧化吸入激發(fā)，其余各組均采用寒冷刺激加卵蛋白腹腔

2、注射和霧化吸入的方法建立寒飲伏肺型哮喘大鼠模型，待模型制備成功后，空白組和模型組灌胃NS，中藥各組灌胃相應(yīng)濃度的苓甘五味姜辛湯，西藥組灌胃地塞米松，每日灌胃1次，并連續(xù)27d。末次灌胃24 h后，給大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉后并固定小鼠后，股動(dòng)脈取血離心后凍存；剖開(kāi)胸腔，然后迅速結(jié)扎并取出右肺，存于－80℃冰箱冰凍保存，以便用于抽提mRNA和提取蛋白用于RT-qPCR和Western blot等技術(shù)檢測(cè)。
　　結(jié)果：1.與空白組比

3、較，各治療組大鼠和模型組光鏡下觀察肺組織均有不同程度的氣道損傷和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的炎癥改變。給予苓甘五味姜辛湯治療后與模型組比較，各治療組的大鼠肺組織病理切片評(píng)分均降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；
　　2.與空白組比較，模型組大鼠血清cAMP、PKA、AQP5、CREB含量明顯降低（P<0.05）；經(jīng)過(guò)藥物治療后，各治療組與模型組比較，大鼠中血清cAMP、PKA、AQP5、CREB含量均升高（P<0.05），且苓甘五味姜辛湯高劑量

4、組和西藥組作用最顯著（P<0.05）；
　　3.與空白組比較，模型組大鼠中cAMP、PKA、AQP5、CREBmRNA表達(dá)量明顯降低（P<0.05）；各治療組與模型組比較，大鼠中cAMP、PKA、AQP5、CREB mRNA表達(dá)量均升高（P<0.05），且苓甘五味姜辛湯高劑量組和西藥組作用最顯著（P<0.05）；
　　4.與空白組比較，模型組大鼠中cAMP、PKA、AQP5、CREB蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯降低（P<0.05）；各

5、治療組與模型組比較，大鼠中cAMP、PKA、AQP5、CREB蛋白相對(duì)表達(dá)量升高（P<0.05），且苓甘五味姜辛湯高劑量組和西藥組作用最顯著（P<0.05）。
　　結(jié)論：1.本研究寒飲伏肺型哮喘大鼠模型復(fù)建成功，并且苓甘五味姜辛湯可以通過(guò)調(diào)節(jié)氣道液體分泌、減輕炎癥反應(yīng)進(jìn)而起到治療寒飲伏肺型哮喘的作用；
　　2. cAMP、PKA、AQP5、CREB基因和蛋白的表達(dá)水平與寒飲伏肺型哮喘病情的活動(dòng)性和嚴(yán)重程度有一定的相關(guān)性，說(shuō)明

6、寒飲伏肺型哮喘大鼠肺組織中cAMP、PKA、AQP5、CREB的表達(dá)水平能夠反映肺組織的損傷程度，進(jìn)而推斷出cAMP、PKA、AQP5、CREB的表達(dá)水平對(duì)哮喘病情的評(píng)估及治療后的效果判定可能存在潛在的指導(dǎo)意義；
　　3.苓甘五味姜辛湯的治療作用可能與上調(diào)cAMP、PKA、AQP5、CREB基因的表達(dá)水平，增加氣道液體分泌的作用有關(guān)。提示cAMP、PKA、AQP5、CREB的基因位點(diǎn)可能是苓甘五味姜辛湯治療寒飲伏肺型哮喘的關(guān)鍵靶位