高生物量富硒酵母的選育及富硒機(jī)理的初步研究.pdf

1、硒是生物體內(nèi)必需的生物微量元素，是生物體內(nèi)重要的生理生物活性物質(zhì)。機(jī)體內(nèi)硒水平下降將直接影響骨骼、心肌及肝、眼、前列腺、甲狀腺等重要的生命器官。天然食品中的硒含量普遍較低，難以滿足人體對硒攝入量的需求，而無機(jī)硒毒性較高不能用于食品中，因而通過微生物合成法開發(fā)含硒食品是很有意義的。 本實驗首先對實驗室保藏的22株酵母菌株進(jìn)行耐硒及富硒性能的比較實驗，篩選獲得耐硒、富硒能力強(qiáng)的菌株為出發(fā)菌株Y2。隨后以此菌株為出發(fā)菌株進(jìn)行60Co

2、γ射線照射誘變育種，篩選出了一株高生物量高富硒的突變菌株YR166。 通過正交實驗確定誘變菌株YR166最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方：麥芽汁10％，(NH4)2SO4 1.0％，KH2PO4 0.2％，Se4+濃度為5μg/mL。通過進(jìn)一步對菌株YR166富硒發(fā)酵工藝條件研究，獲得最佳發(fā)酵條件為：溫度30℃，500mL三角瓶中裝樣60mL，培養(yǎng)6h后加硒，整個培養(yǎng)時間為36h。在此最優(yōu)化條件下，硒酵母硒含量達(dá)到2531.4μg/g，較原

3、菌株提高了74.2％，干酵母生物量達(dá)到14.9g/L，較原菌株提高36.7％，硒總含量達(dá)37717.86μg/g。為了進(jìn)一步探討其在工業(yè)生產(chǎn)的可行性，在搖瓶實驗結(jié)果的基礎(chǔ)上進(jìn)行了10L發(fā)酵罐的富硒發(fā)酵實驗。10L發(fā)酵罐裝量7.5L發(fā)酵培養(yǎng)基，以10％接種量接種培養(yǎng)16h的種子，控制攪拌轉(zhuǎn)速350r/min，通氣量1:0.6vvmin，發(fā)酵溫度30℃，發(fā)酵32h，富硒酵母菌株YRl66的硒含量達(dá)到2608.7μg/g,生物量達(dá)到15.4g

4、/L。 采用斯皮爾曼系數(shù)(R)分析本實驗室10株酵母菌富硒能力與胞內(nèi)谷胱甘肽的含量的相關(guān)程度，計算出R值為0.8939。由于R=0.8939>0.8，表明本實驗所研究的酵母的富硒能力與其谷胱甘肽的含量具有一定的相關(guān)性。 本實驗通過對酵母富硒部位的研究初步結(jié)果表明，酵母富硒的富集部位主要集中在原生質(zhì)體破碎的沉淀物即細(xì)胞的膜蛋白，該部分硒的含量占總硒含量的73％，細(xì)胞壁的硒含量僅占總硒含量的9％，細(xì)胞可溶部分的硒含量占1