2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、東亞鉗蝎氯離子通道毒素(BmK CT)是蝎氯毒素的一個亞型,由36個氨基酸組成,含有4對二硫鍵,與以色列金蝎氯離子通道毒素有68%的同源性且具有相似的生物學(xué)功能。BmK CT能選擇性抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面廣泛分布的氯離子通道,并且能抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)的分泌和活性,從而抑制膠質(zhì)瘤增殖、遷移和侵襲的能力。BmK CT在膠質(zhì)瘤診斷和治療上的應(yīng)用主要是兩方面:一是介導(dǎo)納米藥物的靶向給藥;二是輔助造影,準(zhǔn)確判斷膠質(zhì)瘤和正

2、常腦組織的邊緣界限。
  神經(jīng)膠質(zhì)瘤(Glioma)是最常見的原發(fā)性腦腫瘤,約占所有腦部中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的30%和所有惡性腦腫瘤的80%?;加袗盒阅z質(zhì)瘤病人的平均生存期在過去幾十年并沒有明顯的延長,仍然保持在一年左右。替莫唑胺(TMZ)作為一種小分子口服化療藥,是治療惡性膠質(zhì)瘤的首選藥物。TMZ的主要功能是使膠質(zhì)瘤細(xì)胞的O6甲基鳥嘌呤DNA烷基轉(zhuǎn)移酶失活,引起DNA損傷,最終導(dǎo)致膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡。然而,化療耐藥性的存在導(dǎo)致了療效的

3、不佳。
  本實(shí)驗(yàn)室前期證實(shí)BmK CT能抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖,但是其分子機(jī)制尚不清楚。因此,本研究首先將探討B(tài)mK CT抑制膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖的機(jī)制,其次驗(yàn)證BmK CT能否緩解TMZ的化療耐藥性,增強(qiáng)其對膠質(zhì)瘤的殺傷作用。
  本研究構(gòu)建了重組質(zhì)粒pGEX-6P-1-BmK CT,轉(zhuǎn)化至BL21表達(dá)菌,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)、表達(dá)和純化,最后將重組蛋白GST-BmK CT濃縮至6 mg/ml。利用明膠酶譜實(shí)驗(yàn)證實(shí)GST-Bm

4、K CT能抑制U251細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2,MMP-2分泌抑制與 GST-BmK CT作用劑量呈正相關(guān)性。細(xì)胞劃痕擦傷實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其能抑制 U251細(xì)胞的遷移。
  本研究結(jié)果顯示,融合蛋白 GST-BmK CT能特異地抑制 U251細(xì)胞的增殖。GST-BmK CT刺激U251細(xì)胞96h,細(xì)胞周期各時相發(fā)生了明顯的改變,U251細(xì)胞周期在S期和G2/M期發(fā)生阻滯。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)GST-BmK CT能選擇性的激活p38α,當(dāng)

5、用 p38MAPK信號通路特異性的抑制劑 SB203580預(yù)處理 U251細(xì)胞后再用GST-BmK CT做刺激發(fā)現(xiàn),細(xì)胞周期各時相空白對照組相比在S期和G2/M期幾乎沒有阻滯,表明 p38α在 GST-BmK CT誘導(dǎo)的 U251細(xì)胞周期阻滯中起重要作用。MAPKAPK-2是p38αMAPK下游的一個直接激活靶標(biāo),更是一個DNA損傷細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)激酶,本研究首次證實(shí)GST-BmK CT刺激U251細(xì)胞后,MAPKAPK-2被激活,當(dāng)用

6、SB203580預(yù)處理后,MAPKAPK-2的激活明顯減弱,更進(jìn)一步證明了GST-BmK CT激活p38αMAPK信號通路的選擇性。
  有報道證實(shí)TMZ作用膠質(zhì)瘤細(xì)胞引起的凋亡是由于抑制了mTOR的激活,但是同時也導(dǎo)致了 Akt的進(jìn)一步激活,這是導(dǎo)致耐藥性產(chǎn)生的原因之一。我們發(fā)現(xiàn)GST-BmK CT能選擇性地抑制 AKT的活化,同時發(fā)現(xiàn)其能激活 PTEN的轉(zhuǎn)錄,而GST和TMZ均無此功能。當(dāng)GST-BmK CT與TMZ聯(lián)合使用的

7、時候,能更有效地誘導(dǎo)U251細(xì)胞周期阻滯和凋亡。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),GST-BmK CT作用U251細(xì)胞后,能顯著下調(diào)Bcl2的表達(dá),同時上調(diào)Bax、Caspase3和Caspase9的表達(dá)。GST-BmK CT聯(lián)合TMZ能更快的誘導(dǎo)Bcl2表達(dá)的下調(diào)和Caspase9表達(dá)的上調(diào),加快凋亡信號的產(chǎn)生。這部分內(nèi)容證實(shí)了GST-BmK CT通過抑制Akt信號通路,增強(qiáng)了TMZ的細(xì)胞毒性,從而更加有效的誘導(dǎo)U251細(xì)胞周期阻滯和凋亡。我們推測GS

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