欖香烯聯(lián)合替莫唑胺對膠質(zhì)瘤細胞增殖抑制作用的研究.pdf

1、[目的]
　　1.觀察欖香烯(ELE)、替莫唑胺(TMZ)以及聯(lián)合用藥對人膠質(zhì)瘤細胞株U87及U87干細胞樣細胞(GSLC)增殖抑制的影響;
　　2.觀察欖香烯、替莫唑胺以及聯(lián)合用藥分別對U87及U87GSLC的裸鼠皮下移植瘤的生長抑制效果;
　　3.探討欖香烯聯(lián)合替莫唑胺抑制U87及U87GSLC增殖的可能機制。
　　[方法]
　　1.體外培養(yǎng)人膠質(zhì)瘤細胞株U87以及U87GSLC，細胞毒性/增殖檢測試劑

2、盒(CCK-8)檢測計算欖香烯、替莫唑胺不同濃度單藥及欖香烯聯(lián)合不同濃度替莫唑胺處理后的細胞增殖抑制率;
　　2.分別建立U87、U87GSLC的裸鼠皮下移植瘤模型，各類模型分為空白對照組(Control)、ELE組、TMZ組、ELE+TMZ組，觀察成瘤情況，成瘤后按分組給予藥物腹腔注射處理，觀察給藥后腫瘤生長情況。
　　3.免疫印跡試驗(western blot)檢測欖香烯、替莫唑胺及聯(lián)合用藥后U87以及U87GSLC內(nèi)的

3、干細胞自我更新相關通路蛋白Notch1及堿基切除修復通路(BER)關鍵蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)表達水平的變化。
　　[結(jié)果]
　　1.欖香烯和替莫唑胺均可抑制膠質(zhì)瘤細胞U87及87GSLC增殖，抗腫瘤作用具有劑量依賴性，相同藥物濃度下，欖香烯對U87GSLC增殖抑制作用較U87強，而替莫唑胺對U87增殖抑制作用較U87GSLC強，聯(lián)合用藥效果表現(xiàn)為協(xié)同作用。
　　2.動物實驗結(jié)果顯示，皮下注射U87

4、GSLC組的裸鼠成瘤的時間比注射U87組短，U87GSLC移植瘤組瘤體最終體積大小為:空白對照組＞TMZ組＞ELE組＞ELE+TMZ組;U87移植瘤組瘤體最終體積大小為:空白對照組＞ELE組＞TMZ組＞ELE+TMZ組。
　　3.免疫印跡試驗結(jié)果示，在U87GSLC中，欖香烯可降低的Notch1的表達，表達水平與藥物濃度負相關，替莫唑胺對Notch1的表達水平無明顯影響，固定欖香烯濃度聯(lián)合替莫唑胺用藥可使U87GSLC中的Notc

5、h1的表達水平隨替莫唑胺濃度增加而下調(diào)，但在U87中欖香烯、替莫唑胺單藥及聯(lián)合用藥對Notch1表達水平影響不明顯;欖香烯可下調(diào)U87GSLC和U87的PARP-1的表達，呈濃度依賴性，而替莫唑胺對PARP-1無明顯作用，固定欖香烯濃度聯(lián)合替莫唑胺用藥可使U87GSLC和U87的PARP-1表達水平隨替莫唑胺濃度增加而下調(diào)。
　　[結(jié)論]
　　1.體外實驗表明，欖香烯及替莫唑胺均具有抗膠質(zhì)瘤增殖的作用，欖香烯對U87GSLC

6、中的生長抑制作用強于U87，提示相比于普通膠質(zhì)瘤細胞，欖香烯可能對GSLC具有更高的敏感性，而替莫唑胺在體外細胞實驗中表現(xiàn)為對U87敏感性高于U87GSLC，兩者聯(lián)合應用可提高替莫唑胺抑制膠質(zhì)瘤細胞及膠質(zhì)瘤干細胞樣細胞增殖效果，作用效果表現(xiàn)為協(xié)同作用。
　　2.裸鼠體內(nèi)實驗表明:在裸鼠皮下，U87GSLC具有比U87更強的致瘤能力，欖香烯對U87GSLC移植瘤模型的腫瘤生長抑制效果好，而替莫唑胺則對U87移植瘤模型的腫瘤生長抑制作