Mfn2基因在小鼠先天性白內(nèi)障發(fā)生中的作用研究.pdf

1、目的：
　　Mfn2基因蛋白是一種線粒體外膜融合蛋白，具有維持mtDNA和線粒體呼吸功能穩(wěn)定的作用。此外，Mfn2基因蛋白還存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上，介導(dǎo)線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)連接和鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)。Mfn2基因表達(dá)缺失可以影響線粒體氧化磷酸化，促進(jìn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，導(dǎo)致ROS產(chǎn)生增加。已證明ROS損傷是各種類型白內(nèi)障發(fā)生的共同途徑，本研究擬探討Mfn2基因在表皮外胚層條件敲除后對小鼠晶狀體發(fā)育的影響，并初步研究Mfn2基因敲除導(dǎo)致的小鼠先天性白內(nèi)障發(fā)生機(jī)制

2、。
　　方法：
　　采用原位分子雜交的方法在RNA水平檢測Mfn1、Mfn2基因在C57BL/6小鼠胚胎眼球發(fā)育過程中表達(dá)位置和表達(dá)量。運(yùn)用Cre-Loxp技術(shù)建立Mfn2基因表皮外胚層細(xì)胞特異性敲除小鼠模型;PCR確定胚胎及小鼠的基因型，Le-cre;Mfn2flox/flox(Mfn2 cko)小鼠為基因敲除組，Mfn2flox/flox(Mfn2 flox)小鼠為野生對照組;散瞳后裂隙燈顯微鏡檢查敲除組和野生組小鼠眼球

3、發(fā)育情況，解剖顯微鏡下剖出晶狀體并照相;HE染色法觀察不同胚胎發(fā)育階段及生后兩組小鼠眼球發(fā)育的差異;野生型小鼠作為對照組，免疫熒光檢測胚胎眼球在不同發(fā)育階段Brdu標(biāo)記陽性的晶狀體上皮細(xì)胞數(shù);Tunel法檢測胚胎期及出生后晶狀體上皮細(xì)胞凋亡;Trizol法提取敲除組和野生組小鼠晶狀體RNA，Real-Time PCR法比較兩組Bip mRNA表達(dá)差異。采用student t檢驗(yàn)對各組資料進(jìn)行分析，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)

4、果:
　　Mfn1、Mfn2基因mRNA在眼球發(fā)育過程中均以晶狀體表達(dá)為主，在胚胎11.5天-13.5天，Mfn1基因mRNA在視網(wǎng)膜有短暫表達(dá)。Mfn2基因條件敲除小鼠晶狀體Bip mRNA表達(dá)增加。在未成年期就可觀察到小眼球畸形和白內(nèi)障形成。對胚胎期和生后小鼠眼球切片進(jìn)行HE染色發(fā)現(xiàn)，胚胎14.5天和胚胎17.5天Mfn2基因條件敲除小鼠眼球和晶狀體體積減小，晶狀體纖維略疏松，出生后晶狀體病理變化明顯，從赤道部晶狀體細(xì)胞核正常

5、的弓形結(jié)構(gòu)消失、晶狀體上皮下纖維核保留及小范圍皮質(zhì)空泡迅速發(fā)展為彌漫性晶狀體結(jié)構(gòu)的異常，還出現(xiàn)角膜基質(zhì)層增厚和視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)異常。野生型小鼠胚胎14.5天和胚胎17.5天幾乎無晶狀體上皮細(xì)胞凋亡，Mfn2基因敲除小鼠赤道周圍晶狀體上皮細(xì)胞凋亡明顯。和野生型小鼠相比，Mfn2基因敲除小鼠胚胎17.5天Brdu標(biāo)記的增殖細(xì)胞數(shù)明顯下降。
　　結(jié)論:
　　Mfn1、Mfn2基因mRNA在小鼠胚胎眼球發(fā)育過程中，主要在晶狀體內(nèi)表達(dá)。表皮