6種重金屬化合物對人Bel-7402肝癌細胞毒性及EGFP基因DNA甲基化的影響.pdf

1、目的：以體外培養(yǎng)人Bel-7402肝癌細胞為模型，研究氯化鉛（PbCl2）、乙酸鉛（ Pb(CH3COO)2）、硝酸鉛（ Pb(NO3)2）、氯化銅（ CuCl2）、乙酸銅（Cu(CH3COO)2）、硝酸銅（Cu(NO3)2）等幾種常見重金屬化合物的細胞毒性和去甲基化表觀遺傳毒性。
　　方法：應(yīng)用MTS方法檢測細胞的存活率，以前期研究建立的化學(xué)物去甲基化表觀遺傳毒性評價新方法評價化合物的去甲基化表觀遺傳毒性（使用DNA甲基化酶對

2、pEGFP-C3質(zhì)粒綠色熒光蛋白基因的啟動子區(qū)進行甲基化修飾，隨后將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進人類Bel-7402肝癌細胞株，以所研究的化合物對上述轉(zhuǎn)染后的Bel-7402細胞進行染毒處理，最后根據(jù)細胞綠色熒光強度和熒光陽性細胞比例來定性定量評價研究物質(zhì)的去甲基化表觀遺傳毒性強弱，簡稱 QDMP方法）。
　　結(jié)果：所研究的6種化合物通過MTS實驗顯示均會抑制Bel-7402細胞的增殖。通過對同種重金屬三種不同化合物類型的不同染毒濃度的細胞存活率

3、進行配對設(shè)計t檢驗后顯示，除了硝酸鉛和乙酸鉛對Bel-7402細胞存活率的影響有顯著性差異外，其余各同種重金屬不同化合物間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。而不同種重金屬間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，其對Bel-7402細胞抑制能力為銅高于鉛。去甲基化表觀遺傳毒性檢測結(jié)果顯示， PbCl2、Pb(CH3COO)2、Pb(NO3)2、CuCl2、Cu(CH3COO)2、Cu(NO3)2均可觀察到明顯的去甲基化表觀遺傳毒性，其相對于5-氮-2-脫氧胞苷（5-

4、Aza-CdR）的去甲基化表觀遺傳毒性當(dāng)量分別為2.82E-03、1.50E-03、5.09E-04、3.31E-05、6.87E-05、3.45E-05。通過對同種重金屬三種不同化合物類型的不同染毒濃度的去甲基化表觀遺傳毒性單量值進行配對設(shè)計 t檢驗后顯示差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，而不同種重金屬間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，其去甲基化能力大小為鉛高于銅。
　　結(jié)論：鉛和銅化合物均會使Bel-7402細胞的細胞存活率和轉(zhuǎn)染進細胞的質(zhì)粒上增強型