孤獨癥大鼠發(fā)病機制中突觸與神經(jīng)免疫功能異常的初步研究.pdf

1、目的：研究孤獨癥大鼠前額葉皮質(zhì)(Pregrontal cortex,PFC)與海馬(Hippocampus，HC)的突觸發(fā)育和神經(jīng)免疫功能的變化，及其兩者在孤獨癥發(fā)病機制中的作用。
　　方法：選用Wistar大鼠,在妊娠12.5(Emhanced12.5,E12.5)天時，一次性腹腔注射丙戊酸鈉（Valproic acid,VPA）復(fù)制子代孤獨癥大鼠模型。通過對比觀察對照組大鼠和孤獨癥模型組大鼠的生長發(fā)育（睜眼時間、負(fù)向性實驗、游

2、泳實驗）及行為學(xué)（自梳理實驗檢測刻板動作行為；三箱實驗檢測社會交往行為和對新事物的偏好行為）。運用尼氏染色觀察出生第42天（Postnatal42,P42）對照組和模型組大鼠PFCⅡ/Ⅲ層與HC CA3區(qū)神經(jīng)元的變化。運用Western blot分別檢測P42對照組和模型組神經(jīng)元特異性微管蛋白TUBB3,自噬相關(guān)蛋白Microtubule-associated protein1 light chain3-II(LC3-II)、Becli

3、n-1、P62，突觸相關(guān)蛋白Postsynapptic density protein95(PSD-95)、Gephyrin、突觸素(Synaptophysin,Syn），小膠質(zhì)細(xì)胞（Ionize calcium binging adapter molecule1，Iba1）和星形膠質(zhì)細(xì)胞(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)，炎性細(xì)胞因子Interleukin-6(IL-6)、Interleuki

4、n-1β(IL-1β)在前額葉皮質(zhì)和海馬的表達。運用免疫組化觀察 P42對照組和模型組小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞在PFC和 HC齒狀回（Dentate gyrus,DG）中的數(shù)量、形態(tài)的變化。
　　結(jié)果：
　　1.發(fā)育狀態(tài)與對照組相比，模型組大鼠睜眼時間比正常組大鼠早；P13、P14、P15差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），P12、P16無顯著性差異（P＞0.05）。負(fù)向性實驗結(jié)果顯示：P7、P8、P9模型組大鼠轉(zhuǎn)身時間較正

5、常組顯著延長（P＜0.05），P10兩組子代鼠轉(zhuǎn)身時間無差異（P＞0.05）。游泳實驗結(jié)果顯示：在P9、P11、P13、P15時，與對照組大鼠相比，孤獨癥模型大鼠游泳能力顯著低下，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.行為學(xué)檢測自梳理實驗結(jié)果顯示：模型組大鼠理毛時間較對照組大鼠顯著增加（P＜0.05）；三箱實驗結(jié)果顯示：前10min，對照組大鼠在第一只陌生鼠的箱子中停留時間顯著長于空箱子中停留時間（P＜0.01），模型組

6、大鼠在第一只陌生鼠的箱子中停留時間與空箱子中停留時間無顯著差異（P＞0.05），后10min，對照組大鼠在第二只陌生鼠的箱子中停留時間顯著長于在第一只陌生鼠的箱子中停留時間（P＜0.05），模型組大鼠在第二只陌生鼠的箱子中停留時間與在第一只陌生鼠的箱子中停留時間無明顯差異（P＞0.05）。
　　3.尼氏染色結(jié)果顯示：孤獨癥模型大鼠在PFC與HC神經(jīng)元數(shù)目均多于對照組大鼠，均存在顯著性差異（P＜0.05)。
　　4.Weste

7、rn blot實驗結(jié)果顯示：P42,在PFC和 HC兩個腦區(qū)，孤獨癥模型組 TUBB3、P62、Syn、PSD-95、Iba1、GFAP、IL-6、IL-1β蛋白表達水平比對照組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05)；LC3-II、Beclin1、Gephyrin、蛋白表達水平比正常組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05)；
　　5.免疫組化結(jié)果顯示：與對照組相比，孤獨癥模型組P42 Iba1免疫陽性細(xì)胞胞體增大，突起回縮并減少；

8、GFAP免疫陽性細(xì)胞胞體增大，突起增多。免疫陽性細(xì)胞數(shù)量統(tǒng)計結(jié)果顯示：孤獨癥模型組Iba1免疫陽性細(xì)胞數(shù)量比對照組多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05)，孤獨癥模型組GFAP免疫陽性細(xì)胞數(shù)量比正常組多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05)。
　　結(jié)論：P42，孤獨癥模型大鼠自噬活性降低；孤獨癥模型大鼠突觸發(fā)育異常——興奮性突觸增多，抑制性突觸減少，興奮性突觸/抑制性突觸失衡；孤獨癥模型大鼠神經(jīng)免疫失調(diào)——小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞活化，炎