血紅素氧合酶1對(duì)黑色素瘤細(xì)胞增殖凋亡影響的機(jī)制研究.pdf

1、 Mechanism of Heme Oxygenase 1 on Proliferation and Apoptosis of Melanoma Cells A Thesis Submitted to Chongqing University in Partial Fulfillment of the Requirement for the Master’s Degree of Engineering By Zheng Chunl

2、ingg Supervised by Prof.Zhong Li Pluralistic Supervised by Prof.Huang Xi Specialty:ME(Biological engineering Field) College of Bioengineering of Chongqing University, Chongqing, China May, 2017 重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文 中文摘要 II Western

3、 blotting 結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，A375 細(xì)胞中的 HO-1 過(guò)表達(dá)組其蛋白水平明顯上升，HO-1 干擾組蛋白水平降低，且細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示的熒光強(qiáng)度也得到了類似的結(jié)果。測(cè)序結(jié)果顯示 HO-1 發(fā)生了移碼突變且敲除成功。 2. HO-1 過(guò)表達(dá)有促進(jìn) A375 細(xì)胞增殖的作用，HO-1 干擾對(duì) A375 細(xì)胞增殖無(wú)明顯影響，HO-1 敲除顯著降低 A375 細(xì)胞增殖 CCK8 結(jié)果表明，在 96 小時(shí)內(nèi) HO-1 過(guò)表達(dá)和

4、干擾的細(xì)胞增殖能力與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異，HO-1 敲除的穩(wěn)定細(xì)胞系的細(xì)胞增殖與對(duì)照組細(xì)胞相比受到了明顯的抑制。 結(jié)晶紫染色結(jié)果顯示， HO-1過(guò)表達(dá)細(xì)胞增殖數(shù)量跟對(duì)照組相比有一定的增加，HO-1 干擾組細(xì)胞增殖數(shù)量較對(duì)照組無(wú)明顯差異，但是 HO-1 敲除的穩(wěn)定細(xì)胞系的細(xì)胞數(shù)量明顯比對(duì)照組少很多。裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致顯示，HO-1 過(guò)表達(dá)有促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的作用，HO-1 干擾對(duì) A375 細(xì)胞的增殖影響并不大，但 HO-1 敲除能顯著抑制

5、 A375 細(xì)胞的增殖。 3. HO-1 對(duì) A375 細(xì)胞遷移沒有影響 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示， 三種不同的穩(wěn)定細(xì)胞系在 12、 24、 36、 48 小時(shí)期間，同一時(shí)間段內(nèi)的細(xì)胞遷移的距離均無(wú)明顯差異， 并且沒有有效抑制 A375 細(xì)胞的遷移，說(shuō)明 HO-1 對(duì) A375 細(xì)胞的遷移能力影響不大。 4.HO-1 敲除顯著抑制 A375 細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡 流式細(xì)胞術(shù)的檢測(cè)結(jié)果表明，過(guò)表達(dá) HO-1 有促進(jìn) A375 細(xì)胞增殖，抑制

6、細(xì)胞凋亡的作用，HO-1 干擾對(duì) A375 細(xì)胞的周期凋亡均影響不大，但是 HO-1 敲除能夠顯著促進(jìn) A375 細(xì)胞的凋亡以及 S 期細(xì)胞周期阻滯，說(shuō)明敲除 HO-1 后抑制了細(xì)胞的增殖。 5.HO-1 敲除激活 PI3K/AKT 信號(hào)通路 通過(guò) Western blotting 和 Q-PCR 檢測(cè)了 PI3K、 AKT、 Bax、 P21、 等信號(hào)分子，結(jié)果顯示 HO-1 敲除的穩(wěn)定細(xì)胞系中 PI3K、AKT 等基因表達(dá)明顯降低，

7、Bax、CyclinD1 等基因表達(dá)顯著上升， 因此我推測(cè) HO-1 主要是通過(guò) PI3K/AKT 這條信號(hào)通路引起 A375 細(xì)胞發(fā)生周期阻滯，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 結(jié)論：通過(guò)眾多實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá) HO-1 有促進(jìn) A375 細(xì)胞增殖并抑制其凋亡的作用，干擾 HO-1 不能有效抑制 A375 細(xì)胞的增殖和促進(jìn)凋亡，但敲除 HO-1能夠顯著抑制黑色素瘤細(xì)胞的增殖同時(shí)促進(jìn)凋亡；其主要通過(guò) PI3K/AKT 信號(hào)通路來(lái)調(diào)控。此外，未發(fā)現(xiàn) H