東方白鸛微衛(wèi)星分子標記的位點篩選及保護遺傳學初步研究.pdf

1、東方白鸛是分布于亞洲的大型涉禽，IUCN紅色物種名錄的瀕危(EN)物種。近年來,由于自然棲息地面積驟減、種群數(shù)量下降、分布區(qū)片段化且日益萎縮,目前東方白鸛的全球野生種群數(shù)量僅3000只左右,且呈下降趨勢,對該物種的保護刻不容緩。目前東方白鸛的遺傳學研究進行得較少,尚不能搞清其遺傳背景。
　　微衛(wèi)星是一種高靈敏度的分子標記,由于在信息量、實驗操作、分析方法等方面的明顯優(yōu)勢,微衛(wèi)星標記已經成為保護遺傳學研究領域最有力的分子標記手段,但

2、對于東方白鸛來講,目前尚沒有多態(tài)性的微衛(wèi)星位點,無法應用微衛(wèi)星分子標記來進行遺傳學研究,因此本研究首先利用兩種不同的方法篩選得到東方白鸛的微衛(wèi)星位點,繼而利用篩選出的微衛(wèi)星位點對我國東方白鸛的遺傳多樣性進行分析,為東方白鸛保護策略的制定提供科學依據。
　　1.本研究利用交叉擴增法篩選東方白鸛的微衛(wèi)星位點,采用近緣種黑頭鹮鸛的11個微衛(wèi)星位點做引物,經過對PCR體系的優(yōu)化,在11個位點中有6個得到清晰的擴增條帶,其余5個位點得不到確

3、切的擴增產物。對上述6個位點的擴增產物進行克隆測序分析,發(fā)現(xiàn)其中4個位點上的擴增產物含有微衛(wèi)星重復序列,而另外2個位點中無重復單元。
　　2.利用鏈霉親和素與生物素之間有強親和性的原理,首次采用FIASCO法直接篩選東方白鸛微衛(wèi)星位點。經過酶切連接,探針雜交,磁珠富集,雙鏈恢復,藍白斑篩選,最后得到120個陽性克隆,其中55個含有微衛(wèi)星序列重復序列。經過分析,21條為完美型重復,20條為不完全重復序列,14條為混合重復序列。此外,

4、除二堿基和三堿基序列外,我們還得到了4條六堿基,1條七堿基,2條五堿基,1條四堿基的重復序列。
　　3.在55個位點中選取13個適合的位點設計引物,并將之與交叉擴增法獲得的4對微衛(wèi)星引物一起進行高效液相色譜分析,成功篩選出了能夠應用于東方白鸛的保護遺傳學研究的10個位點,這10個位點分別為C.bo133、C.bo151、C.bo102、C.bo108、C.bo109、C.bo121、C.bo168、C.bo235、Wsu13、Ws