小鼠子宮NK細胞的特性研究.pdf

1、中國科學技術(shù)大學碩士學位論文小鼠子宮NK細胞的特性研究姓名：吳曉妍申請學位級別：碩士專業(yè)：細胞生物學指導教師：田志剛;魏海明20060501中國科學技術(shù)大學碩士畢業(yè)論文 吳曉妍 專業(yè)：細胞生物學摘 要目的：哺乳動物正常妊娠時，母體子宮內(nèi)膜植入位點周圍淋巴細胞中出現(xiàn)大量N K 細胞，該群細胞被稱為子宮N K 細胞( 心Ⅸ細胞) 。盡管它們有著潛在的微弱細胞毒性作用，但在正常妊娠過程中并沒有殺傷胎盤滋養(yǎng)層細胞，推測u N K 細胞是一種對母

2、胎免疫起調(diào)節(jié)作用的N K 細胞亞群，并通過分泌細胞因子在維持母胎免疫耐受中發(fā)揮作用。因此，分離和鑒定u N K 細胞，并檢測u N K 細胞上T h l 、T h 2 型細胞因子表達的研究顯得尤為必要。這對于發(fā)現(xiàn)具有負調(diào)作用的N K 細胞類群及其功能以及相關(guān)免疫性疾病有十分重要的意義。方法：利用流式細胞術(shù)檢測不同懷孕天數(shù)的小鼠子宮蛻膜淋巴細胞各亞群的比例；檢測不同組織來源( 子宮，肝臟，脾臟和外周血) N K 細胞表面抑制受體N K G

3、 2 A 以及C 5 7 B L ／6 J d 、鼠妊娠過程中T h l 、T h 2 型細胞因子的表達譜動力學變化；E L I S A 法檢測不同組織的組織勻漿液上清以及血清中細胞因子的表達：免疫組織學方法觀察I F N - T 清除對小鼠u N K 細胞數(shù)量的影響；通過細胞轉(zhuǎn)輸實驗檢測妊娠對局部N K 細胞的招募能力。結(jié)果：經(jīng)流式細胞術(shù)檢測，妊娠早期的孕鼠u N K 細胞I F N —Y 和T N F ．Ⅱ的表達與相應肝臟組織相比有

4、顯著增加，而I L ．4 和I L ．5 的表達則基本維持在原有水平，并且各組織中N K 細胞N K G 2 A 的表達在妊娠前后無顯著性變化。u N K 細胞清除鼠中，轉(zhuǎn)輸?shù)耐庠碞 K 細胞能進入子宮母胎界面，可能會代償性行使u N K 細胞的部分功能。E L I S A 檢測后發(fā)現(xiàn)子宮分泌的I F N - T ：和T N F ．Ⅸ與u N K 細胞數(shù)的動力學變化特征呈伴隨關(guān)系，并且其絕對量均低于肝臟的分泌能力。由于I F N 吖對u

5、 N K 細胞的擴增有重要的作用，I F N - T 清除鼠的心Ⅸ細胞數(shù)量明顯少于對照鼠。結(jié)論：我們的實驗結(jié)果揭示：u N K 細胞作為重要的天然免疫淋巴細胞，其數(shù)量和功能與外周血、肝臟和脾臟N K 細胞有明顯的差異。u N K 細胞通過分泌T h l 型和T h 2 型細胞因子參與母體對胚胎的免疫應答反應。從妊娠早期到妊娠中期，I F N - Y 和T N F ．a(chǎn) 的分泌量會持續(xù)升高，而妊娠后期有所降低。而T h 2 型細胞因子的量