新生小鼠肝臟巨噬細(xì)胞對(duì)NK細(xì)胞調(diào)控不足致膽道閉鎖的機(jī)理研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面展開論述：
　　第一部分：不同年齡小鼠肝臟巨噬細(xì)胞受RRV作用后分泌及表達(dá)影響NK細(xì)胞功能的細(xì)胞因子及膜配體的變化
　　目的：探討新生鼠肝臟MΦ受RRV刺激活化后分泌及表達(dá)的可調(diào)控肝臟NK細(xì)胞功能的細(xì)胞因子及膜配體的變化
　　方法：RRV分別刺激新生小鼠和成年小鼠肝臟MΦ12h、24h、36h、48h及60h，然后在上述時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)細(xì)胞上清液中IL-12、IL-23、IL-10及TNF-α的濃度及肝臟

2、MΦ表達(dá)Rae-1、CD40陽(yáng)性細(xì)胞比例，確立峰值濃度的作用時(shí)間點(diǎn)。
　　結(jié)果：新生小鼠肝臟MΦ分泌的IL-12、IL-23、TNF-α及表達(dá)的CD40均低于成年小鼠（P＜0.05），但新生小鼠分泌肝臟MΦ分泌的IL-10及表達(dá)的Rae-1要高于成年小鼠（P＜0.05）。新生小鼠IL-12、IL-23、IL-10及TNF-α的峰值濃度作用時(shí)間分別為24h、24h、60h、12h，成年小鼠的IL-12、IL-23、IL-10及TNF

3、-α的峰值濃度作用時(shí)間分別為36h、36h、36h、48h；新生小鼠Rae-1及CD40陽(yáng)性峰值細(xì)胞比例的時(shí)間分別為24h、24h，成年小鼠Rae-1及CD40陽(yáng)性峰值細(xì)胞比例分別為48h、36h。
　　結(jié)論：新生小鼠肝臟MΦ表達(dá)IL-12、IL-23、TNF-α及CD40明顯低于成年小鼠，而Rae-1、IL-10的表達(dá)高于成年小鼠。
　　第二部分:新生小鼠巨噬細(xì)胞對(duì)肝臟NK細(xì)胞調(diào)控不足的關(guān)鍵細(xì)胞因子探討
　　目的：探

4、討RRV刺激后新生鼠肝臟MΦ調(diào)控肝臟NK細(xì)胞的關(guān)鍵細(xì)胞因子的變化
　　方法：分別將新生小鼠和成年小鼠的肝臟MΦ和肝臟NK細(xì)胞共培養(yǎng)后給予RRV刺激，分別在IL-12及IL-10的峰值濃度時(shí)間點(diǎn)處中和IL-12及IL-10，評(píng)估阻斷前后不同年齡小鼠NK細(xì)胞CD69及胞內(nèi)IFN-γ、TNF-α的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：IL-12阻斷后，新生小鼠CD69的表達(dá)較阻斷前下降（P<0.05），而成年小鼠CD69的表達(dá)并無(wú)顯著性差異（P＞

5、0.05）；新生小鼠、成年小鼠阻斷前后NK細(xì)胞表達(dá)IFN-γ均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；新生小鼠NK細(xì)胞的TNF-α阻斷前后無(wú)明顯變化（P＞0.05），但成年小鼠NK的TNF-α阻斷后明顯降低（P＜0.05）。IL-10阻斷后，新生小鼠CD69、IFN-γ的表達(dá)明顯升高（P<0.05），而成年小鼠在IL-10阻斷前后，CD69、IFN-γ的表達(dá)并無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。新生小鼠NK細(xì)胞的TNF-α無(wú)明顯變化（P＞0.05），但

6、成年小鼠NK的TNF-α明顯升高（P<0.05）。
　　結(jié)論：IL-10對(duì)成年小鼠NK細(xì)胞表達(dá)TNF-α的促進(jìn)作用及IL-10對(duì)TNF-α表達(dá)的抑制作用均大于新生小鼠。IL-12并非決定NK細(xì)胞胞內(nèi)IFN-γ的關(guān)鍵因素，新生小鼠IL-10對(duì)NK細(xì)胞IFN-γ的調(diào)控不足可能是發(fā)生BA的原因
　　第三部分：新生小鼠巨噬細(xì)胞對(duì)肝臟NK細(xì)胞調(diào)控不足的關(guān)鍵細(xì)胞連接信號(hào)的探討
　　目的：探討RRV刺激后新生鼠肝臟MΦ調(diào)控肝臟NK細(xì)

7、胞的關(guān)鍵膜蛋白配體。
　　方法：分別將新生小鼠和成年小鼠的肝臟MΦ和肝臟NK細(xì)胞共培養(yǎng)后給予RRV刺激，分別在Rae-1及CD40的峰值陽(yáng)性細(xì)胞比例時(shí)間點(diǎn)處阻斷Rae-1及CD40，評(píng)估阻斷前后不同年齡小鼠NK細(xì)胞CD69及胞內(nèi)IFN-γ、TNF-α的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：CD40阻斷后新生及成年小鼠NK細(xì)胞TNF-α、CD154表達(dá)下調(diào)，阻斷前后IFN-γ無(wú)明顯變化。Rae-1阻斷后，新生小鼠肝臟NK細(xì)胞表達(dá)IFN-γ明顯