TGF-β對小鼠新生隱球菌感染及巨噬細(xì)胞功能影響的研究.pdf

1、研究背景：
　　新生隱球菌是一種機(jī)會(huì)致病真菌，主要感染免疫缺陷人群，如AIDS/HIV患者、腫瘤病人和長期使用免疫抑制劑的群體。新生隱球菌菌體或孢子通常經(jīng)呼吸道進(jìn)入患者體內(nèi)，造成肺部原發(fā)感染，進(jìn)而通過血腦屏障進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引起致命性隱球菌性腦膜炎。機(jī)體感染隱球菌的結(jié)局極大程度上取決于機(jī)體的免疫狀態(tài)，Th1免疫反應(yīng)占主要時(shí)可清除隱球菌。肺巨噬細(xì)胞是機(jī)體抵御隱球菌的第一類免疫細(xì)胞，可通過內(nèi)吞和氧化殺傷方式在第一時(shí)間抵抗入侵的隱球菌

2、，同時(shí)巨噬細(xì)胞也是連接固有免疫和適應(yīng)性免疫的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，可募集T細(xì)胞至感染灶，形成細(xì)胞因子微環(huán)境，進(jìn)而調(diào)控后續(xù)的獲得性免疫反應(yīng)。巨噬細(xì)胞在機(jī)體抗新生隱球菌免疫反應(yīng)中扮演重要角色。轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)是一種多效細(xì)胞因子，在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)方面有重要作用，可影響免疫細(xì)胞增殖、分化及相應(yīng)功能，誘導(dǎo)免疫耐受和影響Th1/Th2細(xì)胞平衡。本課題將研究TGF-β對巨噬細(xì)胞吞噬、殺傷功能的影響，以及在機(jī)體抗隱球菌免疫方面的作用。
　　研究目的：

3、
　　本課題旨在研究TGF-β對巨噬細(xì)胞功能的影響，以及TGF-β在機(jī)體抗隱球菌感染方面的作用。
　　研究方法：
　　用重組小鼠TGF-β提前干預(yù)J774A.1巨噬細(xì)胞，隨后用新生隱球菌感染巨噬細(xì)胞，觀察巨噬細(xì)胞吞噬率的改變;予以TGF-β干預(yù)隱球菌感染后巨噬細(xì)胞，分別比較巨噬細(xì)胞內(nèi)、外隱球菌菌落負(fù)荷在TGF-β干預(yù)后變化，用以評價(jià)巨噬細(xì)胞對胞內(nèi)、外隱球菌殺傷能力;為進(jìn)一步研究巨噬細(xì)胞殺傷能力改變，用溶菌酶試劑盒檢測巨

4、噬細(xì)胞溶菌酶的分泌量，用Griess reagent試劑盒檢測巨噬細(xì)胞NO生成量，并比較TGF-β干預(yù)后二者生成量的變化;建立小鼠隱球菌吸入感染模型，將重組小鼠TGF-β經(jīng)尾靜脈注射干預(yù)小鼠，分兩組在感染早期和晚期分別干預(yù)，觀察小鼠生存曲線、肺、腦組織菌落負(fù)荷，以及肺、腦、外周血中Th1/Th2/Th17細(xì)胞因子濃度變化。
　　結(jié)果：
　　TGF-β干預(yù)導(dǎo)致巨噬細(xì)胞吞噬率下降，而巨噬細(xì)胞NO生成量和溶菌酶分泌量均上升，對吞噬

5、入胞內(nèi)和胞外的隱球菌殺傷力均增加。在小鼠吸入感染模型，進(jìn)行生存曲線分析，TGF-β早期干預(yù)組小鼠抵抗隱球菌能力減弱，死亡時(shí)間提前。此外，感染早期予TGF-β干預(yù)組，肺部菌落負(fù)荷增加，晚期隱球菌播散入腦數(shù)量增加，肺部IFN-γ、 TNF-α濃度降低，IL-6濃度增高，腦組織和外周血Th細(xì)胞因子未見變化。感染后期予TGF-β干預(yù)小鼠組，肺部菌落下降，腦部隱球菌量無差異，肺組織中TNF-α和IL-6濃度升高，腦組織和外周血Th細(xì)胞因子亦未見變