低滲環(huán)境對小鼠骨髓來源巨噬細胞功能的影響及其機制研究.pdf

1、目的：
　　巨噬細胞是一類固有免疫細胞,在機體免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。微環(huán)境可影響巨噬細胞功能,迄今尚未見有關(guān)滲透壓調(diào)控其功能的報道。本課題觀察低滲環(huán)境對小鼠骨髓來源巨噬細胞(BMDM)的影響,并初步探討其分子機制。
　　方法：
　　低滲環(huán)境刺激BMDM,觀察如下指標:
　　1.BMDM吞噬能力的改變(對FITC標記的葡聚糖及IgG包被的乳膠顆粒的吞噬功能)。
　　2.BMDM抗原提呈能力的改變(

2、流式細胞術(shù)檢測BMDM表面CD80/86、MHCⅡ分子表達)。
　　3.ELISA檢測BMDM分泌炎性細胞因子(IL-10、TNF-α)的改變。
　　4.RT-PCR和Westernblot檢測ClC-2(voltage-gated chloride channel)、ClC-3mRNA及蛋白表達;免疫熒光技術(shù)檢測蛋白在細胞內(nèi)分布。
　　5.用siRNA沉默ClC-3,觀察對低滲調(diào)控BMDM吞噬功能的影響。
　　

3、結(jié)果：
　　1.微環(huán)境低滲可明顯增強BMDM對FITC標記的葡聚糖及IgG包被的乳膠顆粒的吞噬能力。
　　2.低滲環(huán)境對BMDM抗原提呈功能(CD80/86、MHCⅡ分子表達水平)無明顯影響
　　3.低滲對BMDM分泌IL-10、TNF-α無明顯影響
　　4.ClC-3在未受刺激的BMDM內(nèi)均勻、彌散分布于胞漿。低滲刺激對BMDM內(nèi)ClC-3蛋白表達水平無明顯影響,但ClC-3逐漸向細胞膜聚集。
　　5.應(yīng)