CpG ODN2395對(duì)新生小鼠MCMV感染免疫功能的影響.pdf

1、目的：用腹腔注射小鼠巨細(xì)胞病毒(murine cytomeglovirus，MCMV)的方法建立BALB/C小鼠全身型MCMV感染模型。分為空白對(duì)照組、MCMV組和CpG ODN2395治療組，通過(guò)對(duì)一些體液免疫指標(biāo)的對(duì)比，以明確體液免疫在新生小鼠MCMV感染中的作用，為今后CMV感染的治療及藥物的研究提供理想的平臺(tái)。
　　方法：將出生3天內(nèi)的新生BALB/C小鼠隨機(jī)(隨機(jī)數(shù)字表)ODN2395治療組，每組30只。對(duì)照組：腹腔注射

2、0.9％氯化鈉20μl隔日1次；感染組：腹腔注射MCMV20μl1次，從接種MCMV當(dāng)日起隔日腹腔注射0.9％氯化鈉20μl；CpGODN2395治療組：腹腔注射MCMV20μl1次，從接種MCMV當(dāng)日起隔日腹腔注射CpG ODN239520mg/kg。每組分為3天、7天、14天三個(gè)亞組，每亞組10只。飼養(yǎng)期間，母乳喂養(yǎng)，每日觀察小鼠的生長(zhǎng)發(fā)育情況。分別在3、7、14天斷髓處死小鼠，留取血清及肝、脾組織，經(jīng)處理后行病理觀察、PCR、We

3、stern及ELISA分析。
　　結(jié)果：1.MCMV Smith毒株的TCID50=105.31/ml。
　　2.MCMV-DNA PCR結(jié)果空白對(duì)照組肝臟MCMV-DNA PCR未出現(xiàn)陽(yáng)性條帶，其余兩組均出現(xiàn)陽(yáng)性條帶，MCMV組在3、7和14天時(shí)肝臟組織MCMV DNA含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。CpG ODN2395治療組肝臟組織MCMV DNA含量在7天時(shí)達(dá)高峰，14天時(shí)明顯下降，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)肝臟組織MCM

4、V DNA含量均低于感染組(P<0.05)。
　　3.病理切片結(jié)果 MCMV感染新生小鼠3天時(shí)肝臟組織HE染色可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞腫脹變性，表現(xiàn)為體積變大、胞漿空淡；7天時(shí)病變加重達(dá)高峰，可見(jiàn)大泡性脂肪變，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞大片狀壞死；在第14天仍保持較高水平。ODN2395治療組3天時(shí)肝臟HE染色與MCMV組類似，7天時(shí)肝臟HE染色亦可見(jiàn)大泡性脂肪變、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，但14天時(shí)肝細(xì)胞腫脹、變性較MCMV組明顯好轉(zhuǎn)，仍有炎

5、性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　4.空白對(duì)照組死亡率較其他組低、生長(zhǎng)發(fā)育情況(體重、身長(zhǎng)、毛發(fā)色澤、精神及食欲等)較其他組好，而CpG ODN2395治療組較MCMV組死亡率低生長(zhǎng)發(fā)育狀況良好。
　　5.Westenblot法測(cè)各組肝臟TLR9蛋白均出現(xiàn)陽(yáng)性條帶，其中MCMV組同一時(shí)間點(diǎn)均較空白對(duì)照組高(P<0.05)。CpG ODN2395治療組同一時(shí)間點(diǎn)表達(dá)高于對(duì)照組和MCMV組，7天時(shí)MCMV組和CpG ODN2395組表達(dá)高于3天

6、、14天(P<0.05)。
　　6.各組肝、脾臟IL-4、IL-6mRNA均出現(xiàn)陽(yáng)性條帶，同一時(shí)間點(diǎn)MCMV組表達(dá)較空白對(duì)照組高(P<0.05)。CpG ODN2395組在各時(shí)間點(diǎn)均較其他兩組表達(dá)高，在7天時(shí)MCMV組和CpG ODN2395組較3天、14天高(P<0.05)。肝臟和脾臟兩指標(biāo)的表達(dá)趨勢(shì)一致。
　　7.ELISA法測(cè)小鼠血清中空白組IL-4、IL-6表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)無(wú)明顯差異，同一時(shí)間點(diǎn)MCMV組表達(dá)較空白對(duì)照

7、組高(P<0.05)。CpG ODN2395組在各時(shí)間點(diǎn)均較其他兩組表達(dá)高，在7天時(shí)MCMV組和CpG ODN2395組較3天、14：天高(P<0.05)。同樣方法測(cè)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，空白對(duì)照組與MCMV組和CpG ODN2395治療組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；ODN2395治療組與MCMV組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；3天時(shí)與7、14天時(shí)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：1.腹腔接