利用Tn5401轉(zhuǎn)座子構(gòu)建解離載體并在蘇云金芽胞桿菌中高效、穩(wěn)定表達(dá)AiiA蛋白.pdf

1、蘇云金芽胞桿菌的AiiA蛋白是一種胞內(nèi)蛋白,能降解參與誘導(dǎo)調(diào)控多種植物病原菌致病基因表達(dá)的N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯信號(hào)分子(AHLs).AiiA蛋白在蘇云金芽胞桿菌各亞種中廣泛存在,但表達(dá)量低,對(duì)N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯信號(hào)分子的降解活力不高;同時(shí)由于AiiA蛋白是一種非分泌型蛋白,致使它無(wú)法與環(huán)境中的N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯信號(hào)分子直接發(fā)生作用,限制了其降解活性的發(fā)揮.蘇云金芽胞桿菌CTC菌株的S-層蛋白基因的啟動(dòng)子是一類(lèi)強(qiáng)啟動(dòng)子,其啟動(dòng)表達(dá)的S

2、-層蛋白可形成晶格狀覆蓋在細(xì)胞表面,S-層蛋白N末端的信號(hào)肽和S-層同源模體(S-layer homology motif SLH)可用作細(xì)胞表面展示載體.該研究試圖利用蘇云金芽胞桿菌CTC菌株S-層蛋白基因的啟動(dòng)子來(lái)增強(qiáng)AiiA蛋白的表達(dá),并利用S-層蛋白表面展示功能將AiiA胞內(nèi)蛋白帶到胞外并錨定在細(xì)胞表面,以與環(huán)境中的AHLs分子直接作用,提高其降解活性.該研究采用蘇云金芽胞桿菌殺蟲(chóng)晶體蛋白基因cry3Aa的啟動(dòng)子來(lái)增強(qiáng)aiiA基

3、因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá),并對(duì)比上述兩種表達(dá)方式對(duì)AiiA蛋白降解AHLs分子活力的影響.該研究選用來(lái)自于莫里遜亞種(subsp.morrisoni)的轉(zhuǎn)座子Tn5401上解離酶識(shí)別的特征序列(Internal Resolution Sequence,IRS)構(gòu)建解離載體pBMB5401,以此為操作平臺(tái)研究?jī)煞N不同AiiA的表達(dá)方式及其組合對(duì)AiiA蛋白降解N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯信號(hào)分子活性的影響,這兩種不同表達(dá)方式是:利用蘇云金芽胞桿菌S-層蛋

4、白在細(xì)胞表面表達(dá)AiiA蛋白以及利用蘇云金芽胞桿菌殺蟲(chóng)晶體蛋白基因cry3Aa啟動(dòng)子來(lái)增強(qiáng)aiiA基因的表達(dá).該研究還比較了三個(gè)重組菌BMBcaiiAR,BMB3aiiAR和BMB3439R對(duì)AHLs分子的降解活性以及對(duì)胡蘿卜軟腐歐文氏菌致病性的抑制效果,研究結(jié)果表明同時(shí)利用殺蟲(chóng)晶體蛋白基因cry3Aa啟動(dòng)子和蘇云金芽胞桿菌S-層蛋白基因ctc的啟動(dòng)子對(duì)aiiA基因進(jìn)行改造獲得的工程菌BMB3439R抗軟腐病效果比BMB3aiiAR和B