β-淀粉樣蛋白25-35誘導(dǎo)HT22細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及二苯乙烯苷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：阿爾茨海默病(AD)是一種老年人常見的癡呆類型，以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙和行為異常為特征的神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變。腦組織里出現(xiàn)大量老年斑以及神經(jīng)原纖維纏結(jié)是AD主要的病理學(xué)特征。其中，β-淀粉樣蛋白(β-amyloid peptide，Aβ)作為老年斑的主要成分，具有非常嚴(yán)重的神經(jīng)毒性，所以影響著AD的形成和發(fā)展。有研究顯示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的三個(gè)通路蛋白表達(dá)狀態(tài)變化，將導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡，進(jìn)而引發(fā)疾病。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立AD細(xì)胞模型，研究Aβ25-35

2、誘導(dǎo)HT22細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生應(yīng)激時(shí)，介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的三個(gè)通路蛋白表達(dá)水平的變化及二苯乙烯苷（Tetrahydroxy stilbene glycoside,TSG）對(duì)其的保護(hù)作用。
　　方法：將HT22細(xì)胞分為未分化組和分化組，未分化組加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)48小時(shí)，分化組為完全培養(yǎng)基貼壁生長(zhǎng)24小時(shí)后加入分化液（Neurobasal培養(yǎng)基和N2添加劑）培養(yǎng)24小時(shí)后，Western blot檢測(cè)兩組細(xì)胞的ATF6、PERK、IRE1蛋

3、白表達(dá)量的變化。不同濃度的Aβ25-35分別作用于兩組HT22細(xì)胞24小時(shí)，用MTT測(cè)定細(xì)胞活力變化。確定最佳AD細(xì)胞模型，將分化型HT22細(xì)胞分為對(duì)照組、Aβ處理組和Aβ＋TSG組，最佳抑制濃度的Aβ25-35作用于HT22細(xì)胞24小時(shí)，加入TSG(0、100、300、500μmol/L)用MTT測(cè)定細(xì)胞活力變化，免疫細(xì)胞熒光檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激三個(gè)通路蛋白的表達(dá)位置，及Western blot檢測(cè)ATF6、PERK、IRE1蛋白表達(dá)量的變

4、化。
　　結(jié)果：⑴ATF6、PERK、IRE1蛋白在未分化組的表達(dá)量明顯高于分化組的表達(dá)量。Aβ25-35對(duì)未分化組細(xì)胞雖有損傷作用，但各組間無(wú)明顯差異，且無(wú)劑量依賴關(guān)系。Aβ25-35可以誘導(dǎo)分化組HT22細(xì)胞發(fā)生損傷，且呈劑量依賴關(guān)系，Aβ25-35(20μmol/L、40μmol/L)作用于分化組HT22細(xì)胞24小時(shí)，細(xì)胞存活率分別為66％、60%，AD模型最佳。⑵Aβ25-35可以誘導(dǎo)HT22細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，且這種內(nèi)質(zhì)