黑芝真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白的原核表達(dá)與功能研究.pdf

1、靈芝，乃是中國(guó)傳統(tǒng)的藥用真菌，無(wú)論是從史書(shū)記載，還是現(xiàn)代社會(huì)的調(diào)查研究，都不難發(fā)現(xiàn)，靈芝從古至今都在中國(guó)民間被廣泛流傳和使用。靈芝含有多種具有生理活性的化學(xué)物質(zhì)，如靈芝多糖、靈芝酸、甾醇類(lèi)、靈芝蛋白類(lèi)、不飽和脂肪酸、維生素和礦物質(zhì)等。真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白(Fungal Immunomodulatory Protein，F(xiàn)IP)是一類(lèi)小分子蛋白質(zhì)，由靈芝（或其他高等擔(dān)子菌子實(shí)體）分離而來(lái)。到目前為止，已分離得到了10種FIPs，即分別從赤芝(

2、Ganoderma lucidum)、松杉靈芝(G.tsugae)、金針菇(Flammulina velutipes)、草菇(Volvariella volvacea)、紫芝(G.japoncium)、小孢靈芝(G.microsporum)、紫靈芝(G. sinensis)、云芝(Trametes versicolor)和鞭毛藻叢赤殼菌(Nectria haematococca)中分離得到的LZ-8(FIP-glu)、FIP-LZ9、F

3、IP-gts、FIP-fve、FIP-vvo、FIP-gja、FIP-gmi、FIP-gs i、FIP-tvc及FIP-nha。
　　本實(shí)驗(yàn)利用黑芝(Ganoderma atrum)FIP基因FIP-gat，構(gòu)建了原核表達(dá)載體p ET-30a::FIP-gat，并將構(gòu)建的原核表達(dá)載體pET-30a::FIP-gat轉(zhuǎn)化到大腸桿菌 BL21宿主細(xì)胞，在大腸桿菌BL21中誘導(dǎo)表達(dá)重組黑芝真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白（rFIP-gat）。在利用Ni

4、-NTA柱純化rFIP-gat后，進(jìn)行了rFIP-gat對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231的凝集作用的實(shí)驗(yàn)研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：黑靈芝真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白能夠在原核細(xì)胞中有效表達(dá)，表達(dá)出的rFIP-gat約占大腸桿菌總蛋白的59.5％，表達(dá)量約為29.76 mg/L；當(dāng)5μg/mL rFIP-gat加入培養(yǎng)細(xì)胞6 h后，MDA-MB-231就出現(xiàn)凝集反應(yīng)，凝集作用的效果和細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間以及rFIP-gat濃度呈正相關(guān)，但效果不明顯。該研究為黑