產(chǎn)堿性蛋白酶菌株Vibrio metschnikovii DL33-51的選育及酶學(xué)性質(zhì).pdf

1、該文以選育具有優(yōu)良性狀的高產(chǎn)堿性蛋白酶菌株及研究此酶在洗滌工業(yè)中的應(yīng)用為基本目的和出發(fā)點,考查了不同因素對菌株發(fā)酵產(chǎn)酶的影響,對酶進行了分離純化與性質(zhì)研究,并分析了該堿性蛋白酶作為洗滌添加劑的可行性.(1)從堿湖篩選一株具有較高產(chǎn)堿性蛋白酶能力的菌株,經(jīng)鑒定為Vibrio metschnikovii.通過紫外誘變和化學(xué)誘變提高菌株產(chǎn)堿性蛋白酶的能力.(2)通過單因子和正交實驗確定了最適產(chǎn)酶的發(fā)酵培養(yǎng)基組成(g/L:酪蛋10.0,玉米粉1

2、0,NaCl14,NaNO<,3> 10,KH<,2>PO<,4> 1,MgSO<,4>0.5,CaCl<,2>0.1,復(fù)合生長素2.5,pH10.4);確定了最適產(chǎn)酶的培養(yǎng)條件(250mL 三角瓶中裝入100mL液體培養(yǎng)基,26℃,150rpm振蕩培養(yǎng),接種量為5﹪ v/v).此培養(yǎng)條件下,利用最適培養(yǎng)基發(fā)酵40小時,發(fā)酵液的堿性蛋白酶活力為3268U/mL.(3)用1.5倍丙酮對無細(xì)胞發(fā)酵液進行沉淀,經(jīng)Q-sepharose陰離子交

3、換柱和Sephacryl S-100凝膠過濾柱分離純化,SDS-PAGE電泳確定酶分子量為29.5kDa.(4)此堿性蛋白酶最適反應(yīng)的溫度和pH分別為60℃、12.0.30-40℃下酶活穩(wěn)定,50、60℃的半衰期分別為7.5小時和30分鐘.pH9.0-11.0緩沖液中酶活穩(wěn)定.此酶具有較強的抗表面活性劑和氧化劑能力,金屬離子Mg<'2+>,K<'+>,Mn<'2+>,Ba<'2+>與Ca<'2+>對酶活有促進作用,Hg<'2+>可完全抑