深海中產(chǎn)蛋白酶菌株的篩選及酶學性質(zhì)分析.pdf

1、蛋白酶是工業(yè)上主要用酶之一，廣泛應用在食品、化妝品和醫(yī)藥等領域。其中，冷適蛋白酶在食品加工和化妝品應用方面有中溫蛋白酶無法取代的優(yōu)勢，其最顯著的三大特點為最適溫度一般在10℃-45℃、0-30℃范圍內(nèi)催化效率較高、熱穩(wěn)定性比中溫酶差。本論文從深海沉積物中篩選到一株產(chǎn)蛋白酶菌株，并對其進行菌種鑒定、培養(yǎng)基組成和發(fā)酵條件的優(yōu)化及酶液的酶學性質(zhì)分析，為冷適酶的開發(fā)應用提供基礎研究。結果如下：
　　通過對菌株的形態(tài)學觀察和生理生化指標分析

2、，確定該菌株為革蘭氏陽性菌株，能夠利用多種糖源發(fā)酵，接觸酶試驗和甲基紅試驗為陰性，硝酸鹽，精氨酸雙水解酶試驗和VP試驗為陽性。進一步對該菌株的16S rDNA序列比對，發(fā)現(xiàn)其與Bacillussubtilis strain Acj115有較近的親緣關系，確定其為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，命名為Bacillus subtilis.N-9。
　　采用單因素試驗和正交試驗，在搖瓶水平上對菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基組成和發(fā)

3、酵條件進行優(yōu)化，得到優(yōu)化后的培養(yǎng)基組成為(g/L):木糖25，蛋白胨35，酵母浸出物16，NaCl10，KH2PO43，K2HPO47;優(yōu)化后的發(fā)酵條件為:pH5.5，裝液量80mL，種齡15h，接種量3.5％，在以上優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基組成和發(fā)酵條件進行發(fā)酵，測定蛋白酶酶活為306.93U/mL，較優(yōu)化之前提高了223.56％。
　　采用硫酸銨分級沉淀對菌株發(fā)酵所產(chǎn)蛋白酶液進行初步純化，分析該蛋白酶的酶學性質(zhì)。作為一種冷適酶，該蛋