靶標(biāo)蛋白分離和鑒定新技術(shù)的探索性研究.pdf

1、蛋白質(zhì)組學(xué)是當(dāng)前生命科學(xué)領(lǐng)域研究的重要熱點(diǎn)之一，它從整個(gè)蛋白質(zhì)組水平上揭示生命過程和規(guī)律。蛋白質(zhì)組的鑒定涉及了若干關(guān)鍵的技術(shù)平臺(tái)，主要包括蛋白質(zhì)的分離富集、蛋白質(zhì)的分析和生物信息學(xué)研究，蛋白質(zhì)組的鑒定為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、翻譯后修飾、以及蛋白質(zhì)相互作用等方面的研究提供了重要基礎(chǔ)。本課題則針對(duì)蛋白質(zhì)的分離富集、蛋白質(zhì)修飾的分析以及蛋白質(zhì)相互作用等關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)，進(jìn)行了新的探索性研究。本研究分為三個(gè)部分：
　　 第一部分以組蛋白作為目標(biāo)蛋白，

2、建立了一種基于適配體技術(shù)分離富集組蛋白的新方法。該方法較以往的技術(shù)更為簡(jiǎn)便，具有較好的組蛋白識(shí)別功能，且能夠直接從復(fù)雜的細(xì)胞裂解液中提取組蛋白的成分。此外，該方法能夠與質(zhì)譜技術(shù)很好的結(jié)合用于組蛋白翻譯后修飾的鑒定研究。
　　 第二部分以酵母蛋白激酶為目標(biāo)蛋白，運(yùn)用基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)方法系統(tǒng)地分析了激酶蛋白半胱氨酸殘基上的各種修飾形式。第一，我們探索性地揭示了5種主要的體外修飾形式產(chǎn)生的機(jī)理和原因；第二，發(fā)現(xiàn)了3種潛在的翻譯后修

3、飾；第三，利用質(zhì)譜解析和生物信息學(xué)分析在半胱氨酸殘基上發(fā)現(xiàn)了28種未知修飾形式。我們的初步研究不僅擴(kuò)展了目前已知的半胱氨酸殘基的修飾形式，而且為揭示蛋白激酶新的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能和新的修飾形式的提供了線索。
　　 第三部分以食管癌細(xì)胞中與腫瘤侵襲密切相關(guān)的細(xì)胞骨架結(jié)合蛋白Ezrin為目標(biāo)，運(yùn)用體內(nèi)同位素標(biāo)記定量方法(SILAC)結(jié)合生物信息學(xué)分析，鑒定了兩種不同侵襲水平的食管癌細(xì)胞中，可能與Ezrin存在相互作用的所有蛋白及其差異性表