胞質(zhì)M-CSF通過抑制HIF-1α-BNIP3-Bax信號通路增強乳腺癌MCF-7細胞的凋亡抗性.pdf

1、目的：探討巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）對人乳腺癌MCF-7細胞HIF-1α/BNIP3/Bax信號通路的影響和意義。
　　方法：用含10％NBCS(新生牛血清)的1640培養(yǎng)基分別培養(yǎng)MCF-7-M細胞（胞質(zhì)穩(wěn)定轉染M-CSF的MCF-7細胞），MCF-7-C細胞（穩(wěn)定轉染空載體的MCF-7細胞），親本MCF-7細胞。蛋白印跡檢測M-CSF對ADM處理前后MCF-7細胞HIF-1α、BNIP3、Bax、Caspase3和Ca

2、spase9蛋白的影響；免疫共沉淀檢測M-CSF對ADM處理前后MCF-7細胞 Bcl-2與 BNIP3和Bax相互作用的影響；Hoechst33342染色法、流式細胞術檢測胞質(zhì)M-CSF對MCF-7細胞凋亡的影響。
　　結果：蛋白印跡法結果顯示，未用 ADM處理時，與 MCF-7以及 MCF-7-C細胞相比，MCF-7-M細胞 HIF-1α（p<0.05）和BNIP3（p<0.01）表達顯著降低，Bax、Caspase3、Cas

3、pase9蛋白的表達沒有明顯差異（p>0.05）；用 ADM處理后，MCF-7-M細胞中的HIF-1α、BNIP3、Bax、Caspase3和Caspase9蛋白表達情況顯著性降低（p<0.01）； MCF-7細胞與MCF-7-C細胞HIF-1α、BNIP3、Bax、Caspase3、Caspase9的表達無顯著差異(p>0.05)。免疫共沉淀結果顯示：未用ADM處理時，三種細胞Bcl-2結合的BNIP3無顯著性差異（p>0.05)，M

4、CF-7-M細胞Bcl-2蛋白結合的Bax顯著高于MCF-7細胞或MCF-7-C細胞（p<0.05）；用ADM處理后，MCF-7-M細胞Bcl-2蛋白結合的BNIP3顯著低于MCF-7細胞或MCF-7-C細胞（p<0.01），MCF-7-M細胞Bcl-2蛋白結合的Bax高于MCF-7細胞與MCF-7-C細胞（p<0.05）。Hoechst33342染色結果顯示，隨著 ADM濃度的增加，三種細胞的凋亡細胞數(shù)均增多；與MCF-7以及MCF-

5、7-C細胞相比，每個ADM濃度預處理條件下，MCF-7-M細胞凋亡率顯著性降低（p<0.05）。流式細胞術結果顯示，用ADM預處理后，MCF-7-M細胞凋亡率比MCF-7細胞或MCF-7-C細胞顯著降低（p<0.01）。
　　結論：胞質(zhì) M-CSF抑制 HIF-1α/BNIP3/Bax信號通路增強MCF-7細胞的凋亡抗性；胞質(zhì)M-CSF促進Bcl-2與BNIP3蛋白分子解離，增強Bcl-2與Bax蛋白分子的結合，抑制乳腺癌MCF-