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1、目的:以MCF-7細(xì)胞、轉(zhuǎn)染空載體的MCF-7細(xì)胞、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染M-CSF的MCF-7細(xì)胞為模型,探討胞質(zhì)M-CSF對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞抗藥性的影響及可能機(jī)制。
方法:采用MTT及臺(tái)盼蘭染色法檢測(cè)細(xì)胞的存活率;高效液相色譜法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)藥物濃度;RT-PCR鑒定耐藥基因MDR1的表達(dá);Western Blotting鑒定細(xì)胞耐藥P-糖蛋白(P-gp)及抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)。
結(jié)果:對(duì)照組轉(zhuǎn)染空載體的MCF-7細(xì)胞
2、(命名為MCF-7-C細(xì)胞)和MCF-7細(xì)胞與實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染M-CSF的MCF-7細(xì)胞(命名為MCF-7-M細(xì)胞)比較:MTT及臺(tái)盼蘭拒染實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞在阿霉素(Adriamycin, ADM)、紫杉醇(TAX)等藥物的作用下MCF-7-M的存活率均高于對(duì)照組細(xì)胞(p<0.05),對(duì)照組之間無(wú)顯著差異(p>0.05)。高效液相色譜實(shí)驗(yàn)顯示:阿霉素同一藥物濃度在實(shí)驗(yàn)組MCF-7-M細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度明顯少于對(duì)照組細(xì)胞(p<0.01);紫杉醇在對(duì)照
3、組中均可測(cè)出,且組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05),但實(shí)驗(yàn)組MCF-7-M細(xì)胞內(nèi)由于藥物濃度過(guò)低儀器未檢測(cè)。RT-PCR實(shí)驗(yàn)顯示MCF-7-M細(xì)胞的MDR1基因表達(dá)量較MCF-7-C細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞高(p<0.01)。Western blot實(shí)驗(yàn)顯示MCF-7-M細(xì)胞的Bcl-2、P-gp蛋白表達(dá)量高于MCF-7-C細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞(p<0.01)。
結(jié)論:胞質(zhì)M-CSF能增加人乳腺癌MCF-7細(xì)胞對(duì)阿霉素和紫杉醇的
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