胚胎干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及定向分化研究.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文胚胎干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及定向分化研究姓名：郭箭申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：邵健忠20030601浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文A b s t r a c tS i n c et h ef i r S te m b r y o n i cs t e mc e l ld e r i V a t i o n 齔} mm o u s e b I a S t o c y s tb yB r i t i s hs c i e n

2、 t i s l si n 1 9 8 1 ，g r o u p so f s c i e n t i s t sw e r ed e v o t e di n t 0n 】e r e s e a r c hf j e l do fs t 鋤c e l l s ．I n1 9 9 8 ，t 、Ⅳos c i e n t i n cg m u p s o f A m 耐c a o b t a i n e d h u m a n e m b

3、 r y o n i c s t e mc e l l sa n dh l l m a ne m b r y o n i cg e m c e l l sr e S p e c t i v e l y 丘o mh u m a n b l a s t o c y s t Sa n dg o n a d a lr i d g e O f e a r l y 即1 b r y o s ．T h ec u l 晰a t i o n o f e

4、m b r y o I l i c s t e m c e U p r o v i d e s v 弧ts p a c e f o rt h e r e s e a r c h o n c e n d i 虢r e m i a t i o n a I l d t i s s u e d e v e l o p m c n t ． I t a l s o p r o V i d e se x p e r i m e n tm o d e

5、l sf o r t l l e r e s e a r c ho f g ∞e 矗m c t i o n 血g ．O u rr e s e 盯c hw o r ki sb a s e do n t h e d c r i V a t i o n a I l d c u l t i V a t i o n o f h u m a n e m b r y o n i c g e m l c e l l a n d m o u s e鋤b

6、口o f l i c s t e I nc e l l ，a n d t l l ed i r ∞t e dd i 丑’e r e n t i a t i o no f m o u s e 鋤b r ，r o m c s t e mc e l l s ．T h e f i r s te x p e r i m e n ti sm e d e r i V a t i o na n d c u l t i V a t i o n o f h

7、 u l T l a ne m b r y o n i cg e 肌c e l l ．T h ep r i m a r y 塒m o r d i a lg e 珊c e l l si s0 b t a i n 舶m m e h u m 肌e m b r y o s a 丘e r4 - 8w e e k s o f p r e g n a n c yA 船r n l e c h a I l i c a ld e s e c t i o n

8、 a n d e n z y m i c d i g e s t i o n ，t h e c e l l sw e r ec u l t u r e do n n 1 0 u s ee m b r y o n i cf i b m b l a s to rh l 加1 a ne m b o r o n i cf i b r o b I a S tf 醅d e rl a y e ri n a c t i v a t e d b y m

9、i t o m y c i n ．T h e m e d i u m c o n t a i n s s e v e r a l c y t o k i n e s ：L I F ( 1 e u k e m i ai I l l l i b i t o 】了f 缸t o r ) ，b F G Fa n d F o s k o I i n ．T h e r e 、v a sa b o u t 7d a y s i m e Ⅳa Ib e

10、t w e e n e v c r y伯，o p a s s a g e s ．E Gc e l l c I o n e s c a I l b e 南u n d 抽e a c hp r i m a r yc u I t u r e 矗o mt h o s ee m b r y o so fa p p r o p r i a t ea g e ．I n c u l t u r eo fo n ee m b r ) ，o n i cc e

11、 l l l i n e ，E Gc e Uc l o n e sm a i n t a i n e da f k r9 p a S s a g e s ．T h ea l k a l i n ep h o s p h a t a s ea c t i v i t yt e S ts h o w e dm e s e c e l l sm a i m a i n e d t h ec h a r a c t e r o f p r i

12、m o r d i a lg e 咖c e l l s ．T h es e c o n de x p e r i m e n ti s d e r i V 砒i o na n dc u l t i V a t i o no f m t l S ee m b r y o n i cs t e mc e l l s ．T h eb l a s t o c y s t w a s o b t a i n 丘o m 也em o u s e a

13、f I e r3 ．5d a y s o f p r e g t l a I l c y ' a n d w a sc u l t i v a t e dO nt 1 1 e m o u s ee m b r y o I l i cf i b m b l a s tf b d e rl a y e r T h eb I a s t o c ”tu s u a l l ya t t a c ht om e f b e d e r

14、l a y e ra n e r4 8h o u r s ，m e nt h ei 加e rc e l lm a s sb e g a n t 0g r o wa n df o r r nab i gc e U m a s so f e m b r y o n i cs t e mc e l l s ．T h e s ec e l l sc a nf o m c e l lc l o n e sv v i mt h e c o n f

15、0 H n a t i o n o fe m b r y o n i cS t e mc e l l ．T h e r ew a sa b o u t 5 - 7 d a y so fi n t e r v a Ib e t w e e n e v e r y t w o p a s s a g e s ．T h e A K P a c t j v i t yt e s ts h o w e d t l l e s ec c 】l sh

16、 a d m a i n t a i n e dt h ec h a r a c t e ro f s t e mc e l l s ．1 kE Sc e Uc l o n e sd e c r c a s e d 蚰dd i s a p p e a r e d 伊a d u a l l ya R e r9 p 粥s a g e s ．I nt l l e t l l i r de x p e r i m e n t ，w ef i r