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文檔簡介
1、Itoh等人研究發(fā)現(xiàn),在ColE2質(zhì)粒的origin下游存在一個長約84bp的DNA片段,它能明顯增強ColE2 DNA的復(fù)制,并將此DNA片段稱為增強子Ⅱ—enhancerⅡ.他們認為enhancerⅡ可能是通過增強ColE2 origin與Rep蛋白的結(jié)合,或使Rep蛋白更易脫落并被DNA聚合酶Ⅰ取代而使ColE2 DNA的復(fù)制效率提高.為了研究增強ColE2質(zhì)粒復(fù)制的enhancerⅡ片段的作用機理,該研究構(gòu)建了重組質(zhì)粒pBlue
2、script-ColE2 ori-enhancerⅡ.首先根據(jù)目的片段的序列設(shè)計一對兩端分別帶有XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位點的PCR引物,并以pEC22為模板擴增出含ColE2 ori-enhancerⅡ的DNA目的片段.接著將經(jīng)雙酶切的目的的片斷克隆到載體pBluescriptⅡSK+中.經(jīng)限制性酶切分析、PCR鑒定初步篩選出陽性重組質(zhì)粒.再進行DNA測序,從而成功獲得重組質(zhì)粒pBluescript-ColE2 ori-enhance
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