NK-,4-因子原核基因工程表達(dá)體系的構(gòu)建及生物學(xué)活性初步測定.pdf

1、山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文NK因子原核基因工程表達(dá)體系的構(gòu)建及生物學(xué)活性初步測定姓名：王勇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：章汴生;牛勃2003.5.20山西醫(yī)科大學(xué) 2 0 0 3 屆碩士學(xué)位論文5 ’G C G G A l ’C C A T G C C A G C A C T G A A G A T h 燃G C 3 ’r 游引物j ’( ：( 剛( G A C T ’r A 7 I ’T A G A C l l

2、A T q ’( j 1 ’A G G T G T G G T 3 ’l ’l 仃砹汁”垂托人迎‘i j q - 物I 樣釘限公司進(jìn)行引物擴(kuò)增可行性分H f ．絀泠h i ：+ 典，j I 物u J { j 。2 ) 模板一例測定蠶托人迎’i j 中物IW 有限公司進(jìn)行H G F —o 鏈c D N A 序列測定，與G E N E B A N K 對(duì)比證實(shí)，序列止確。3 ) P C I i j J 增N K 4 | = | 的叢岡建丘合

3、適的P C R 反府體系，成功獲取了N K 4 墓岡，測序結(jié)果止確。4 ) 表達(dá)找體∞瞇一4 T —I 鑒定及線性載體的制備J , ' , ZJ i ?№訓(xùn)載體多克隆何點(diǎn)上的B a m H I 和fS a l 。I 限制性| 』= | 切酶分別進(jìn){ r 單酶叫與艤酶切井與D N A 標(biāo)準(zhǔn)相比較，證實(shí)載體止確。5 ) 口G 脒¨lS K I 表達(dá)克隧的構(gòu)建采H J 誘0 農(nóng)達(dá)法結(jié)合質(zhì)粒人小直接比較法和P C R 快速擴(kuò)增

4、法篩選出日I 性重組千．井進(jìn)行了表達(dá)，證實(shí)獲得了融合蛋白G S T —N K 4 岡子的高技表達(dá)，農(nóng)j 厶莓町以·0 1 劍全菌蚩白的5 5 ％。6 ) W e s l 【·I ' l l B 1 0 tL i n g 鑒定G S T —N K 4經(jīng)w e s t e F n —b l o t t i n g 鑒定，表達(dá)蛋白確實(shí)為G S ?I —N K 4 。2 X K l 閃J ’E i 核發(fā)達(dá)條{ ，l

5、：的研究1 ) p G E X ～4 ’r - 卜N K 4 表達(dá)曲株B L 2 t 生| 王= 特性研究①?! I 特什分忻奠堆?’弘h s d S g a l ( ^ t s 8 5 7 i n d l S a m 7 n i n 5 l a c U V 5 一T 7 基困1 ) ，該閑株宵m l r ，1 ’乖¨I ．O R 兩種蚩向酶缺陷，這有利丁目的蛋白的高表j 厶。②I ) ( ；¨一一{ I 一- l

6、—N K 4 一B L 2 l 生長曲線研究住3 ( ) ℃溫度時(shí)，繪制p G E X 一4 T 一1 一N K 4 - - B L 2 1 的生K 曲線，發(fā)現(xiàn)該兇往l 小時(shí)t a 分時(shí)進(jìn)入對(duì)數(shù)生歐期。2 ) p G E X 一4 T 一卜N K 4 表達(dá)菌株B L 2 1 誘導(dǎo)起始時(shí)間的研究根據(jù)曲的中K 曲線，在其生k 達(dá)劍對(duì)數(shù)生艮期中斤_ } { l 】，即2 小時(shí)作為誘* 起始時(shí)間。3 ) p G E X - 4 q 。卜N K