NK4因子原核基因工程表達(dá)體系的建立及抗腫瘤生物學(xué)活性研究.pdf

1、1目的：1.1建立NK4因子原核基因工程表達(dá)體系。1.2建立NK4因子分離純化工藝。1.3NK4因子抗腫瘤活性的研究測(cè)定。 2方法：我們通過(guò)原核基因工程表達(dá)體系制備出一種新型的抗腫瘤、抑制血管生成的蛋白質(zhì)因子-NK4因子。采用體外實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行NK4蛋白因子的抗腫瘤活性測(cè)定，包括MTT法測(cè)定NK4因子對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷作用、NK4因子的不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲重組基底膜的影響、對(duì)小鼠黑色素瘤細(xì)胞與基底膜成分粘附能力的影響、對(duì)腫瘤細(xì)

2、胞趨化性運(yùn)動(dòng)能力的影響、對(duì)大鼠動(dòng)脈無(wú)血清培養(yǎng)形成微血管樣結(jié)構(gòu)的影響。 3結(jié)果：3.1成功建立pGEX-4T-1-NK4/BL21表達(dá)體系。3.2GST-NK4融合蛋白得到純化及復(fù)性。3.3NK4因子的的體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)：NK4(10ug/m1)組對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、B16-BL6小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移株、A2780(人卵巢癌)、人結(jié)腸癌細(xì)胞有抑制作用(抑制率＞30％)，其中對(duì)B16-BL6小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移株、A2780(人卵巢

3、癌)、人結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制率大于陽(yáng)性對(duì)照組(順鉑)。 4結(jié)論：利用基因工程技術(shù)，成功建立pGEX-4T-1-NK4/BL21表達(dá)體系，并摸索了該表達(dá)體系的最佳實(shí)驗(yàn)室操作條件。再經(jīng)過(guò)復(fù)性和GST親和層析得到純品NK4因子。癌的侵襲、轉(zhuǎn)移行為是惡行腫瘤最本質(zhì)的兩大特征，如何防止及治療侵襲及轉(zhuǎn)移成為癌治療研究的焦點(diǎn)之一。通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)NK4(10ug/m1)組對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、B16-BL6小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移株、A2780(