利用Cyt b基因?qū)ξ粗L骨進行物種的鑒定.pdf

1、由于鯨類是經(jīng)濟價值巨大的海洋資源，人類對其進行了大規(guī)模的商業(yè)獵殺。同時，由于其棲息地的破壞、減少和環(huán)境的惡化，一度使得某些物種瀕于滅絕。鯨類數(shù)量的急劇減少引起了科學界的廣泛關注，開展了一系列例如鯨類種群數(shù)量的調(diào)查和監(jiān)測、鯨類擱淺網(wǎng)絡的建立、鯨類誤捕和偶然死亡原因的調(diào)查以及鯨類體內(nèi)有毒物質(zhì)的研究。80年代以來，隨著分子生物學的迅猛發(fā)展，涌現(xiàn)出一批分子進化和種群遺傳分析方法和技術，而這些技術也很快地被引入到鯨類保護生物學領域。本實驗選用Cy

2、t b基因序列作為分子標記，從分子生物學的角度對未知的鯨類骨骼樣品進行了物種的鑒定，采用蛋白酶K消化法和苯酚／氯仿有機抽提法提取基因組DNA，并做了下述改進：骨粉在消化前用滅菌的純水浸泡；消化液中蛋白酶K的終濃度提高至0.3mg/ml；有機抽提過程中苯酚：氯仿：異戊醇(25：24：1)抽提兩遍，氯仿：異戊醇(24：1)抽提兩遍。實驗結(jié)果如下： 1.獲得了樣品V1、V2、V3、V5、R、Z1的基因組DNA，電泳檢測呈現(xiàn)輕微片斷化的

3、跡象。 2.獲得了樣品V1、V2、V5、Z1的PCR擴增產(chǎn)物，電泳檢測顯示產(chǎn)物大小約為550bp。 3.測序獲得樣品V1、V2、V5、Z1的Cyt b基因部分序列，并且樣品V2、V5、Z1的序列完全相同，為同一單倍型。 4.GenBank比對結(jié)果如下：樣品V1與大村鯨的相似度最高，達99﹪；樣品V2、V5、Z1與大西洋小須鯨的相似度最高，達98﹪。初步推斷樣品V1為大村鯨，樣品V2、V5、Z1為大西洋小須鯨；

4、 5.基于UPGMA法和NJ法構建的系統(tǒng)發(fā)育樹均表明樣品V1的Cyt b序列與大村鯨的同源序列聚類，置信度達100﹪；樣品V2、V5、Z1的Cyt b序列與大西洋小須鯨的同源序列聚類，置信度為100﹪。支持GenBank的比對結(jié)果。 6.MEGA軟件分析結(jié)果表明樣品V1的Cyt b序列與相似度最高的大村鯨單倍型(登錄號AB201257、AB201256)存在1～2個核苷酸差異，成為一個新的單倍型，這是我國南海的首次記錄；樣品