利用Cyt b基因?qū)ξ粗L骨進(jìn)行物種的鑒定.pdf

1、由于鯨類(lèi)是經(jīng)濟(jì)價(jià)值巨大的海洋資源，人類(lèi)對(duì)其進(jìn)行了大規(guī)模的商業(yè)獵殺。同時(shí)，由于其棲息地的破壞、減少和環(huán)境的惡化，一度使得某些物種瀕于滅絕。鯨類(lèi)數(shù)量的急劇減少引起了科學(xué)界的廣泛關(guān)注，開(kāi)展了一系列例如鯨類(lèi)種群數(shù)量的調(diào)查和監(jiān)測(cè)、鯨類(lèi)擱淺網(wǎng)絡(luò)的建立、鯨類(lèi)誤捕和偶然死亡原因的調(diào)查以及鯨類(lèi)體內(nèi)有毒物質(zhì)的研究。80年代以來(lái)，隨著分子生物學(xué)的迅猛發(fā)展，涌現(xiàn)出一批分子進(jìn)化和種群遺傳分析方法和技術(shù)，而這些技術(shù)也很快地被引入到鯨類(lèi)保護(hù)生物學(xué)領(lǐng)域。本實(shí)驗(yàn)選用Cy

2、t b基因序列作為分子標(biāo)記，從分子生物學(xué)的角度對(duì)未知的鯨類(lèi)骨骼樣品進(jìn)行了物種的鑒定，采用蛋白酶K消化法和苯酚／氯仿有機(jī)抽提法提取基因組DNA，并做了下述改進(jìn)：骨粉在消化前用滅菌的純水浸泡；消化液中蛋白酶K的終濃度提高至0.3mg/ml；有機(jī)抽提過(guò)程中苯酚：氯仿：異戊醇(25：24：1)抽提兩遍，氯仿：異戊醇(24：1)抽提兩遍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.獲得了樣品V1、V2、V3、V5、R、Z1的基因組DNA，電泳檢測(cè)呈現(xiàn)輕微片斷化的

3、跡象。 2.獲得了樣品V1、V2、V5、Z1的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，電泳檢測(cè)顯示產(chǎn)物大小約為550bp。 3.測(cè)序獲得樣品V1、V2、V5、Z1的Cyt b基因部分序列，并且樣品V2、V5、Z1的序列完全相同，為同一單倍型。 4.GenBank比對(duì)結(jié)果如下：樣品V1與大村鯨的相似度最高，達(dá)99﹪；樣品V2、V5、Z1與大西洋小須鯨的相似度最高，達(dá)98﹪。初步推斷樣品V1為大村鯨，樣品V2、V5、Z1為大西洋小須鯨；

4、 5.基于UPGMA法和NJ法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)均表明樣品V1的Cyt b序列與大村鯨的同源序列聚類(lèi)，置信度達(dá)100﹪；樣品V2、V5、Z1的Cyt b序列與大西洋小須鯨的同源序列聚類(lèi)，置信度為100﹪。支持GenBank的比對(duì)結(jié)果。 6.MEGA軟件分析結(jié)果表明樣品V1的Cyt b序列與相似度最高的大村鯨單倍型(登錄號(hào)AB201257、AB201256)存在1～2個(gè)核苷酸差異，成為一個(gè)新的單倍型，這是我國(guó)南海的首次記錄；樣品