成肌細胞與心肌細胞體外聯(lián)合培養(yǎng)的實驗研究.pdf

1、近年來,研究人員開始尋求以細胞移植的方法治療心力衰竭、心肌缺血及擴張性心肌病等心臟病,緩解終末期心臟病的心室重構(gòu),減少死亡率,提高生活質(zhì)量.用于細胞移植的種子細胞較多,有成肌細胞(即骨骼肌衛(wèi)星細胞),骨髓基質(zhì)干細胞,胚胎、新生或成年的心肌細胞,胚胎或幼年組織的平滑肌細胞等,其中成肌細胞移植研究應(yīng)用較多.成肌細胞移植后即在心肌的環(huán)境中,發(fā)生何種變化,是否能與心肌細胞形成閏盤似的電機械連接,即形成功能合胞體,既是研究熱點又存在許多分歧,由于

2、體內(nèi)系統(tǒng)較復(fù)雜,常受到許多因素的影響,該實驗建立體外成肌細胞與心肌細胞共同培養(yǎng)模型,模擬機體心臟內(nèi)環(huán)境,研究心肌細胞與成肌細胞的相互影響和作用,另外該實驗還詳細介紹了分離、提純和鑒定成肌細胞方法及其生長的生物學(xué)特性.方法:該實驗采用原代培養(yǎng)的方法,以膠原酶I和胰蛋白酶混合消化法獲取成肌細胞,以非連續(xù)密度梯度離心法(Percoll分離液)分離、純化成肌細胞;倒置光學(xué)顯微鏡下觀察成肌細胞生物學(xué)特性,繪制成肌細胞生長曲線;透射電鏡下觀察其超微

3、結(jié)構(gòu);以一抗α-Actin,Desmin單克隆抗體及SABC免疫組織化學(xué)染色法鑒定成肌細胞;在自主跳動的成肌細胞中加入異丙腎上腺素(Isoproterenol,IP)使終濃度為10<'-7> mol·L<'-1>,研究細胞對IP的反應(yīng)性,分加藥前和加藥后兩組,計數(shù)細胞自發(fā)跳動頻率,進行統(tǒng)計學(xué)分析.建立成肌細胞與心肌細胞體外聯(lián)合培養(yǎng)的模型:在體外分別分離、提純成肌細胞和心肌細胞,以1:1細胞數(shù)混合(濃度均為1×10<'8>·L<'-1>)