FISH技術(shù)驗證毛冠鹿Y染色體及核型多態(tài)機(jī)理初步研究.pdf

1、自二十世紀(jì)八十年代開始就有關(guān)于毛冠鹿的研究報道。毛冠鹿種內(nèi)核型存在多態(tài)現(xiàn)象，到2002年為止在毛冠鹿種內(nèi)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了5種不同的核型，不同核型間的差別主要集中在幾條異染色質(zhì)豐富的染色體上。對不同核型中性染色體的確定曾有不同的觀點。另外，關(guān)于毛冠鹿種內(nèi)核型的多態(tài)現(xiàn)象是否是亞種間的差異或者個體差異，以及這種多態(tài)現(xiàn)象產(chǎn)生的機(jī)制如何等問題仍未能得到很好的解釋。為了對毛冠鹿的性染色體進(jìn)行驗證并進(jìn)一步探討上述問題做了如下工作： 1)通過顯微切割

2、技術(shù)獲得赤麂Y<,2>單條染色體，經(jīng)LA-PCR擴(kuò)增模板量，然后通過PCR法制備地高辛標(biāo)記的涂染探針，并通過Southern blot對該探針進(jìn)行驗證。設(shè)計引物在毛冠鹿基因組中擴(kuò)增Sry基因全長，測序驗證之后通過PCR法制備熒光素標(biāo)記的Sry基因探針。利用這兩種探針分別對雄性毛冠鹿的中期染色體進(jìn)行原位雜交，涂染探針的雜交得到了陽性結(jié)果。結(jié)合本實驗室的基因定位研究對毛冠鹿的Y染色體進(jìn)行了驗證。 2)采用原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)方法對來

3、自成都動物園的8頭毛冠鹿的皮膚細(xì)胞進(jìn)行了染色體研究，結(jié)果出現(xiàn)4種不同的核型，有一種核型與以前所報道的幾種核型不一致，確定為新核型(2n=47♀，X染色體為異型， )。至此，在毛冠鹿種內(nèi)共發(fā)現(xiàn)了6種不同的核型。根據(jù)核型圖、C-帶及薄層掃描結(jié)果分析了毛冠鹿種內(nèi)染色體多態(tài)的表現(xiàn)形式、遺傳規(guī)律及可能的產(chǎn)生機(jī)制。 3)通過PCR法制備熒光素標(biāo)記的著絲粒序列探針，然后分別對4種不同核型的毛冠鹿中期染色體進(jìn)行熒光原位雜交，結(jié)果在4種不同核型