可控降解PHB為單體及其發(fā)酵條件的探索研究.pdf

1、以實驗室保藏的14株可以降解PHB的菌株為出發(fā)菌株，用紙層析法篩選出3株菌株，分別是青霉(Penicillium sp.)DS9701-02、青霉(Penicillium sp．)DS9707和青霉(Penicillium sp.)DS9713a-01，三株菌株均能將PHB降解為PHB單體即3-羥基于酸。 本實驗摸索了各菌株發(fā)酵液的處理方法，即將發(fā)酵液于4℃，12000×g離心30min，除去菌絲體，然后抽濾(抽濾膜3～4μm)

2、除雜之后，用超濾膜(截留分子量10000)超濾，再用0.25μm的膜過濾后直接用于液相色譜分析。 用液相色譜法對發(fā)酵液中的3-羥基于酸進行定量分析。摸索了液相色譜分析的最佳條件：Shim-pack Vp-ODS C<,18>柱(150L×4.6)；流動相為乙腈：純水(v/v)=15∶85，pH=2.8；紫外檢測波長為210nm；進樣量為20μl；流速為1ml/min：柱溫10℃。 通過單因素考察初步了解菌株的營養(yǎng)需求條件

3、，以碳源、氮源、磷源及培養(yǎng)基起始pH值為考察因素，設(shè)計一個四因素三水平的正交實驗。確定三株菌株降解PHB產(chǎn)生單體的最佳培養(yǎng)條件，結(jié)論如下： 1．青霉(Penicillium sp.)DS9701-02的最佳發(fā)酵時間是7天，對菌株降解PHB產(chǎn)生單體的影響因素按大小依次為：起始pH、碳源、磷源和氮源。適用于青霉(Penicilliumsp.) DS9701-02的最優(yōu)培養(yǎng)基配方為：碳源濃度為0.75g/L，氮源濃度為0.5g/L，磷

4、源濃度為11.94/4.54g/L，起始pH為5.5。 2．青霉(Penicillium sp．)DS9707的最佳發(fā)酵時間是7天，對菌株降解PHB產(chǎn)生單體的影響因素按大小依次為：碳源、起始pH、磷源和氮源。適用于青霉(Penicillium sp.)DS9707的最優(yōu)培養(yǎng)基配方為：碳源濃度為0.75g/L，氮源濃度為2g/L，磷源濃度5.97/2.27/L，起始pH為5.5。 3．青霉(Penicillium sp.)