耐熱超氧化物歧化酶基因的克隆表達(dá)及蛋白的純化、相關(guān)酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD,EC1.15.1.1)是一種廣泛存在于動(dòng)一植物和微生物中的金屬酶。它催化超氧化物陰離子自由基(O2-)發(fā)生歧化反應(yīng)，從而清除O2-，在維持生物體內(nèi)超氧陰離子自由基產(chǎn)生與消除的動(dòng)態(tài)平衡中起著重要的作用。根據(jù)結(jié)合的金屬離子不同，超氧化物歧化酶分為三類(lèi)：第一類(lèi)是Cu,Zn-SOD，第二類(lèi)能與Fe2+或Mn2+或者兩者中的任意一個(gè)都能結(jié)合，即Fe-SOD，Mn-SOD或Fe/Mn

2、-SOD，第三類(lèi)是Ni-SOD。 我們從一株地?zé)嵫挎邨U菌(Geobacillus)的菌株中克隆得到三種sod基因，F(xiàn)e/Mn-sod，Mn-sod和Cu/Zn-sod。分析表明三種SOD分別與Geobacillus kaustophilus HAT426菌株相應(yīng)的SOD序列同源性最高?？寺∵@三個(gè)基因到畢赤酵母表達(dá)載體pPIC9中，電擊轉(zhuǎn)化宿主菌GS115，發(fā)現(xiàn)一株有微弱表達(dá)?？寺n-sod基因到原核表達(dá)載體pET-28a中，轉(zhuǎn)

3、化大腸桿菌BL21菌株，蛋白表達(dá)量很高。蛋白純化后比活達(dá)2726.7U/mg。該酶在60 ℃高度穩(wěn)定，80℃作用2.5個(gè)小時(shí)仍有70％的活力，90℃作用2.5個(gè)小時(shí)還有30％的活力。離子重組實(shí)驗(yàn)表明Mn2+對(duì)維持酶的活性非常重要。根據(jù)活性和非活性SDS-PAGE試驗(yàn)的結(jié)果，推測(cè)此酶為同型四聚體結(jié)構(gòu)。 為獲得東方粘蟲(chóng)顆粒體病毒(Pseudelatia separata granulovirus,PsGV)基因組序列，本實(shí)驗(yàn)室采用隨

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