北蟲草（Cordyceps militaris）超氧化物歧化酶分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，簡稱SOD)是廣泛存在于需氧生物體內(nèi)、催化超氧化物陰離子自由基(O<,2>)或其質(zhì)子化產(chǎn)物HO<,2>歧化為H<,2>O<,2>與O<,2>的極為重要的一種金屬酶。在對SOD進(jìn)行的一系列研究中，發(fā)現(xiàn)SOD的存在與生物體抗衰老、抗腫瘤、營養(yǎng)狀況、免疫性疾病、炎癥及輻射防護(hù)有關(guān)。北蟲草是傳統(tǒng)的名貴中藥材，研究結(jié)果表明北蟲草的藥理性質(zhì)與其所含的SOD活性有關(guān)。 本文研究了不同的

2、液體培養(yǎng)基C/N、培養(yǎng)時間和溫度對北冬蟲夏草菌絲體生長量的影響，得到最佳培養(yǎng)條件即發(fā)酵液的最佳C/N比為50：1，C/N過高或過低都不利于菌絲的生長；菌絲生長周期為7天，較長；最佳培養(yǎng)溫度范圍為23～25℃，要求比較嚴(yán)格。以最佳培養(yǎng)條件為基礎(chǔ)制備發(fā)酵液，利用甲苯破壁法提取粗酶并且了解到最佳分離提取條件，然后利用Sephadex G-100柱(1.5cmx50cm)和DEAE-FF柱(1.0cmx50 cm)純化出超氧化物歧化酶(SOD)

3、。結(jié)果表明，用PBS從北蟲草中提取SOD最佳工藝條件為：原料與磷酸鹽緩沖液最佳配比1:3(m/V)，磷酸鹽緩沖液最佳pH值為7.73，最佳提取時間為3 h；純化倍數(shù)可達(dá)到粗酶液的4.09倍。 對SOD部分酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行測定，提純后的酶在紫外全波長掃描中在690nm左右出現(xiàn)了特征吸收峰，且對熱比較穩(wěn)定，最適pH為7.8，在pH值為7-8范圍內(nèi)SOD的酶活性比較穩(wěn)定，且活力最大。另外大部分糖對SOD的活力沒有顯著影響，有機(jī)酸影響比較明