人體指甲中尿酸定量方法的建立及硫代脯氨酸結(jié)構(gòu)同位素標(biāo)記新型質(zhì)譜衍生化試劑的開(kāi)發(fā).pdf

1、尿酸是生物體內(nèi)一種內(nèi)源性抗氧化劑，主要由食物中的嘌呤分解和細(xì)胞代謝分解的核酸而來(lái)。近年來(lái)，高尿酸血癥和痛風(fēng)的患病率持續(xù)增加。而痛風(fēng)因在早期階段沒(méi)有明顯癥狀，所以并不能早期發(fā)現(xiàn)。而且人體血尿酸水平的增高會(huì)導(dǎo)致心血管及其他代謝性疾病。因此迫切需要開(kāi)發(fā)一種簡(jiǎn)便，廉價(jià)，高靈敏的早期診斷方法。非侵襲性指甲樣本相對(duì)于血液，尿液等生物樣本，具有采集方便，無(wú)感染危險(xiǎn)，易于儲(chǔ)存等優(yōu)點(diǎn)，目前尚未有將其應(yīng)用于痛風(fēng)診斷的文獻(xiàn)報(bào)道。
　　本研究中使用高效液

2、相(HPLC)-紫外檢測(cè)器(UV)首次建立了對(duì)人體指甲中尿酸的定量分析方法。利用日立HPLC系統(tǒng)，GL Sciences公司的ODS-3色譜柱(250mm×4.6mm I.D.，4.0μm)，流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液(74mmol/L，pH2.2)∶甲醇=98∶2，流速1.0mL/min，在284nm處進(jìn)行紫外檢測(cè)，分析時(shí)間為10分鐘。在1.0-10000ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r2≥0.9999);最低檢測(cè)限(S/N=3)為2.0pg;日

3、內(nèi)、日間精密度范圍為1.68％～8.02％;平均加樣回收率為103.40％。對(duì)10名健康志愿者（5男5女）10個(gè)手指中尿酸含量進(jìn)行了比較。結(jié)果表明男性10個(gè)手指中尿酸含量普遍高于女性，男性和女性大拇指及小拇指中尿酸含量變動(dòng)較大，然而食指、中指及無(wú)名指三個(gè)手指中尿酸含量相對(duì)穩(wěn)定，所以在以后的研究中采用上述三個(gè)手指的指甲為尿酸定量分析的樣本。在此，我們?yōu)榱诉M(jìn)一步驗(yàn)證指甲在痛風(fēng)診斷中的有效性，對(duì)26名健康志愿者(22-60歲)及22名痛風(fēng)患者

4、(26-65歲)的手指甲中尿酸含量進(jìn)行了比較，得出健康志愿者手指甲中尿酸定量范圍為44.57±9.37ng/mg，而痛風(fēng)患者尿酸定量范圍為144.7±47.93ng/mg。痛風(fēng)患者組指甲中尿酸含量明顯高于健康志愿者組。具有顯著性差異(p＜0.01)，因此人體指甲中尿酸定量分析檢測(cè)為痛風(fēng)診斷提供了一種新的非侵襲方法。
　　手性是內(nèi)源性代謝物的一個(gè)重要特征，然而現(xiàn)代代謝組學(xué)研究的主流LC-MS聯(lián)用技術(shù)，也無(wú)法鑒別手性代謝物。但柱前衍生

5、化方法可以解決手性代謝物分離問(wèn)題，所以我們以帶手性中心的硫代脯氨酸為母體與帶同位素標(biāo)記苯甲酰氯進(jìn)行反應(yīng)，合成了具有靶向氨基官能團(tuán)手性代謝物同位素標(biāo)記質(zhì)譜手性試劑。并應(yīng)用于手性代謝物1-苯乙胺(R，S-PEA)、1-(1-萘基)乙胺(R，S-NEA)的分析，R，S-PEA分離度(Rs)為1.90，R，S-NEA分離度(Rs)為2.21，達(dá)到完全分離，分離效能良好。在質(zhì)譜檢測(cè)中，最佳轟擊能量為40eV時(shí)，獲得高強(qiáng)度的特征碎片離子m/z為77