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文檔簡介
1、作為一種普遍存在的翻譯后修飾,糖基化對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能有著重要影響。研究認為人類許多疾病的發(fā)生和發(fā)展都與蛋白上N-糖鏈的結(jié)構(gòu)和表達量的改變有關(guān),通過N-糖鏈定量分析,可以精確地尋找疾病中糖鏈發(fā)生的異常變化,對疾病的診斷和治療起著不可估量的作用。目前基于質(zhì)譜檢測的化學(xué)標記是進行N-糖鏈定量的有效方法,但這些技術(shù)都需要在實驗過程中進行額外的化學(xué)反應(yīng),對標記效果和樣品的純化都有不利影響。Endo-M酶轉(zhuǎn)糖基反應(yīng)可以很好地解決上述問題。該酶可
2、以在切N-糖鏈的同時,將糖鏈轉(zhuǎn)移到糖基受體。在本研究中,合成了幾種可提高質(zhì)譜檢測靈敏度和分辨率的輕、重穩(wěn)定同位素標記的受體,為建立基于糖鏈轉(zhuǎn)移酶的N-糖鏈定量方法提供必要的受體。
在第一章中,合成了兩對穩(wěn)定同位素標記Endo-M酶糖基受體和兩個氘代糖基受體,考查了每一步化合物的最佳反應(yīng)條件,優(yōu)化每一步化合物了純化方法,并對每一步化合物進行了核磁、質(zhì)譜、紫外、液相、熔點等表征。為N-糖鏈的糖類物質(zhì)進行相對定量分析,提供衍生化試劑
3、的需求。
在第二章中,以(d0/d8)-PDPZ-Boc-Asn-GlcNAc為穩(wěn)定同位素標記受體,利用 Endo-M-N175Q的糖鏈轉(zhuǎn)移反應(yīng),進行了唾液酸糖肽SGP的糖鏈轉(zhuǎn)移。通過UPLC-ESI-TOF-MS分析,檢測到分別被d0-/d8-受體標記的轉(zhuǎn)糖基產(chǎn)物,且其相對豐度比值接近1:1。此結(jié)果為建立一種具有操作簡便、靈敏度高、準確度高的N-糖鏈相對定量分析方法打下基礎(chǔ)。
在第三章中,合成的新受體可以與羧酸結(jié)合
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