產甲殼素酶菌株HD001的篩選、發(fā)酵及酶的分離純化與酶學性質研究.pdf

1、甲殼素是由N-乙酰-2-氨基-2-脫氧-D-葡萄糖以β-1，4糖苷鍵連接而成的多糖，是多數真菌細胞壁、無脊椎動物、甲殼類動物外骨骼以及昆蟲體表和昆蟲中腸圍食膜的主要結構成分，是自然界多糖生物合成量僅次于纖維素的第二大天然資源，其降解產物具有多種用途。甲殼素酶能夠催化水解N-乙酰-D-葡萄糖胺糖苷鍵，降解甲殼素得到幾丁寡糖或N-乙酰氨基葡萄糖。甲殼素酶廣泛存在于植物、動物及微生物細胞和組織中，從微生物中篩選產甲殼素酶菌株，并進行酶的研究，

2、不僅具有一定的學術價值，而且對于自然資源利用、生物防治、環(huán)境保護、食品、醫(yī)藥等領域的發(fā)展都具有重要的實際意義。 本研究以篩選高產甲殼素酶菌株為目的，從海洋泥樣中分離、篩選出一株產甲殼素酶的菌株，命名為HD001，該菌在以膠體甲殼素為唯一碳源的平板上能產生較高活性的甲殼素酶。 通過對菌株HD001的發(fā)酵條件研究，確定了其產甲殼素酶最適培養(yǎng)基組分為(W/V)：(NH4)2SO4 2.0％、NaCl 0.5％、K2HPO4 0

3、.07％、KH2PO4 0.03％、MgS04-7H2O 0.05％、葡萄糖0.1％、酵母粉0.3％、膠體甲殼素1.5％；最適產酶培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基起始pH值6.0，接種量1.0％(v/v)，以500mL，三角瓶裝瓶量為150mL，培養(yǎng)溫度30℃，160r/min搖瓶培養(yǎng)120h，發(fā)酵液酶活力可達1.7U/mL。 在優(yōu)化條件下發(fā)酵培養(yǎng)菌株HD001，發(fā)酵液冷凍離心，上清液采用30％～90％硫酸銨分級鹽析、透析、冷凍干燥后制得甲殼

4、素酶粗酶，粗酶經DEAE-纖維素離子交換層析、Sephacryl S-100凝膠過濾層析分離純化，制得電泳純的甲殼素酶，酶純化倍數為11.98，收率為28.1％。SDS-PAGE電泳顯示單一條帶，其相對分子質量約為85.7kDa。 對甲殼素酶進行酶學性質的研究，結果表明該甲殼素酶的最適反應溫度為50℃，最適反應pH為5.6：酶活力在pH 5.5～7.0時相對穩(wěn)定；25℃放置24h酶活力基本不變。Mg2+對酶的活性有促進作用，Zn