人類雙特異性磷酸酶DUSP18和DUSP23的基因克隆和功能研究.pdf

1、雙特異性磷酸酶是酪氨酸磷酸酶中最近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新的亞類，這個(gè)家族中的成員既能對(duì)磷酸化酪氨酸去磷酸化，也能對(duì)磷酸化絲/蘇氨酸去磷酸化。目前已知，大部分雙特異性磷酸酶都在有絲分裂原激活蛋白磷酸酶信號(hào)途徑(MAPK)中行使重要生理功能。在這篇論文中，我們從人類胎腦cDNA文庫(kù)中克隆了兩個(gè)新的人類雙特性磷酸酶DUSP18(人類雙特異性磷酸酶18)和DUSP23(人類雙特異性磷酸酶23)。DUSPl8cDNA全長(zhǎng)2450個(gè)堿基對(duì)，編碼一個(gè)188個(gè)氨

2、基酸的蛋白質(zhì)。DUSP23全長(zhǎng)726個(gè)堿基對(duì)，編碼150個(gè)氨基酸。這兩個(gè)蛋白質(zhì)都具有一個(gè)雙特異性磷酸酶催化結(jié)構(gòu)域，與其他很多雙特異性磷酸酶不同的是沒有CDC25同源結(jié)構(gòu)域。 DUSPl8在幾乎所有細(xì)胞系和組織中表達(dá)，而DUSP23只在胎兒組織和睪丸、結(jié)腸兩個(gè)成人組織中表達(dá)。另外，DUSPl8能在受胞外刺激時(shí)大幅提高自身表達(dá)量而DUSP23的表達(dá)量與刺激無關(guān)。細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)顯示：DUSPl8在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中都有而DUSP23只在細(xì)

3、胞質(zhì)中表達(dá)，兩者的定位都不隨胞外刺激改變。 在以pNPP為底物的體外磷酸酶檢測(cè)中，DUSPl8和DUSP23都表現(xiàn)出了磷酸酶活性，而且它們還能在體外對(duì)磷酸化酪氨酸和磷酸化絲/蘇氨酸去磷酸化，提示它們可能是新發(fā)現(xiàn)的雙特異性磷酸酶。 接著我們采用磷酸化檢測(cè)，體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)和免疫共沉淀等方法研究它們的體內(nèi)底物。結(jié)果發(fā)現(xiàn)DUSP23只能在體外對(duì)p44ERKl去磷酸化，而在體內(nèi)不能，提示DUSP23可能不是MAPK磷酸酶。相反的，D

4、USPl8在體內(nèi)體外都能特異性的結(jié)合SAPK/JNK并使之去磷酸化。但對(duì)p38或p44ERKl都沒有作用。進(jìn)一步的信號(hào)通路檢測(cè)實(shí)驗(yàn)顯示，DUSPl8在體內(nèi)還能抑制SAPK/JNK-F游信號(hào)途徑。這些結(jié)果提示DUSPl8可能在體內(nèi)是SAPK/JNK活性的重要調(diào)控因子。 我們還對(duì)DUSPl8進(jìn)行了酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，DUSPl8還可能與其它一些蛋白質(zhì)相互作用，這些蛋白包括CyclinA、SGTl、PRA(S100A6)、SKB