雙特異性磷酸酶1(Dusp1)在膽囊癌生長、侵襲轉(zhuǎn)移及血管形成中的作用.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 Dusp1在膽囊癌及膽囊正常組織中的表達
　　目的:
　　觀察雙特異性磷酸酶1(Dusp1)在膽囊癌組織及正常膽囊組織中的表達量，初步探討Dusp1在膽囊癌發(fā)生中的作用。
　　方法:
　　Dusp1免疫組織化學染色，檢測47例臨床膽囊癌及25例正常膽囊組織標本，研究Dusp1在膽囊癌組織及正常膽囊組織中的表達情況，比較在癌組織和正常組織中;高度惡性膽囊癌與低度

2、惡性膽囊癌組織中Dusp1的含量差異。
　　結(jié)果:
　　Dusp1在膽囊癌組織主要表達量強弱不一，以陰性和弱陽性表達居多(51.1％)，中等陽性表達次之(31.9％);少部分為強陽性表達(18％);在正常膽囊組織中主要是中等陽性(40％)和強陽性表達為主(32％);部分呈弱陽性表達(28％)?？傮w上膽囊癌組織中Dusp1表達量低于正常組織中，Dusp1在高度惡性膽囊癌組患者的腫瘤組織中表達量低于低度惡性組的腫瘤組織。

3、　　結(jié)論:
　　與正常膽囊組織相比，Dusp1在膽囊癌組織中呈下調(diào)性表達;隨著腫瘤侵襲性增強，Dusp1表達量降低，初步提示Dusp1在膽囊癌中可能起抑制腫瘤進展的作用。
　　第二部分 Dusp1對膽囊癌增殖和克隆形成能力的影響
　　目的:
　　研究Dusp1對膽囊癌增殖和克隆形成能力的影響。
　　方法:
　　運用慢病毒載體系統(tǒng)，在膽囊癌細胞系GBC-SD和SGC996中構(gòu)建Dusp1敲減及過表達細胞

4、系。通過MTS細胞增殖實驗和克隆形成實驗，檢測在膽囊癌細胞中Dusp1敲減以及Dusp1過表達對細胞增殖和克隆形成能力的影響。同時，構(gòu)建裸鼠皮下成瘤模型，在動物體內(nèi)研究SGC996細胞中過表達Dusp1時對腫瘤增殖能力的影響。
　　結(jié)果:
　　運用慢病毒載體系統(tǒng)，在Dusp1含量相對較高的GBC-SD細胞中構(gòu)建了Dusp1敲減細胞系，在GBC-SD和SGC996中構(gòu)建Dusp1過表達細胞系，并通過Real-timePCR和W

5、estern Blot方法進行驗證病毒感染效率。在GBC-SD細胞中敲減Dusp1，細胞增殖和克隆形成能力增強。在SGC996和GBC-SD細胞中過表達Dusp1，細胞增殖和克隆形成能力均減弱。進一步的機制研究顯示Dusp1敲減細胞中pERK含量升高，Dusp1過表達細胞中pERK含量降低，Dusp1可能通過降低pERK表達量抑制細胞增殖;在裸鼠皮下成瘤模型中，將Dusp1過表達的SGC996細胞與其對照組細胞各接種到6只裸鼠皮下，約1

6、0天后實驗組和對照組裸鼠均成瘤，觀察20天后，Dusp1過表達時裸鼠皮下腫瘤的體積與重量小于對照組腫瘤，腫瘤免疫組化結(jié)果提示Dusp1過表達腫瘤組織中pERK表達量降低。
　　結(jié)論:
　　Dusp1能抑制膽囊癌增殖和克隆形成能力，這一功能可能通過負向調(diào)控pERK表達量實現(xiàn)。
　　第三部分 Dusp1對膽囊癌侵襲轉(zhuǎn)移和血管形成能力的影響
　　目的:
　　研究Dusp1對膽囊癌侵襲轉(zhuǎn)移和血管形成能力的影響。

7、r>　　方法:
　　運用慢病毒載體系統(tǒng)，在膽囊癌細胞系GBC-SD和SGC996中構(gòu)建Dusp1敲減及過表達細胞系。通過細胞劃痕實驗，transwell遷移及侵襲實驗，分別檢測Dusp1敲減或過表達對細胞遷移/侵襲能力的影響。動物實驗通過上述兩組細胞分別接種到10只裸鼠皮下，在動物體內(nèi)研究Dusp1對膽囊癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響，進一步觀察了腫瘤血管形成情況。
　　結(jié)果:
　　運用慢病毒載體系統(tǒng)，在膽囊癌細胞系GBC-SD

8、和SGC996中構(gòu)建Dusp1敲減及過表達細胞系。并通過Real-time PCR和Western Blot方法驗證病毒感染效率。細胞劃痕，遷移及侵襲實驗顯示，在GBC-SD細胞中敲減Dusp1，促進了GBC-SD的遷移和侵襲。在SGC996和GBC-SD細胞中過表達Dusp1，抑制了細胞的遷移和侵襲。進一步的研究提示Dusp1可能通過Dusp1-pERK-MMP2抑制膽囊癌細胞的侵襲能力。在裸鼠皮下轉(zhuǎn)移瘤模型中，將Dusp1過表達的S

9、GC996細胞與其對照組細胞分別接種到10只裸鼠皮下，一個月后解剖觀察腫瘤轉(zhuǎn)移情況。在Dusp1過表達組中有一只裸鼠發(fā)生轉(zhuǎn)移，對照組3只裸鼠發(fā)生轉(zhuǎn)移;Dusp1在體內(nèi)實驗中也抑制了膽囊癌的轉(zhuǎn)移。觀察裸鼠皮下腫瘤的血管形成情況及CD31免疫組化染色結(jié)果提示Dusp1抑制腫瘤血管形成，進一步機制研究發(fā)現(xiàn)Dusp1可能通過Dusp1-pERK-VEGFA通路抑制膽囊癌的腫瘤血管形成。
　　結(jié)論:
　　Dusp1抑制了膽囊癌的侵襲轉(zhuǎn)