自噬特異性基因beclin-1在胃癌血管生成擬態(tài)中的表達(dá)及作用機(jī)制.pdf

1、目的:研究自噬特異性基因 beclin1在胃癌細(xì)胞 SGC7901體外血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry,VM)形成過程中表達(dá)情況及其對VM形成的作用機(jī)制。
　　方法:選擇未經(jīng)處理的胃癌 SGC7901細(xì)胞為空白組,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 beclin1 SiRNA結(jié)合質(zhì)粒的胃癌 SGC7901細(xì)胞為抑制組,轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的SGC7901細(xì)胞為陰性對照組,檢測三組細(xì)胞饑餓誘導(dǎo)下生存與侵襲能力變化,同時(shí)分別在體外三維培養(yǎng)下構(gòu)建血管

2、生成擬態(tài)模型后觀察三組細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成(管狀結(jié)構(gòu)數(shù)目,長度,交點(diǎn))變化,并檢測 VM形成前后三組細(xì)胞干性基因(c-myc,oc t-3/4,so x-2,no tc h-1)和擬態(tài)血管形成調(diào)控基因(MMP-2,9,E-cad)的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:胃癌 SGC7901體外三維培養(yǎng)構(gòu)建擬態(tài)血管模型,VM形成后 beclin-1基因表達(dá)水平顯著高于 VM形成前水平(P<0.05)。當(dāng)利用 RNA干擾技術(shù)抑制beclin-1表達(dá)后

3、,VM管樣結(jié)構(gòu)形成受阻:空白組,陰性對照組及 beclin-1抑制組的VM管樣結(jié)構(gòu)數(shù)目分別為(37.6±4.5,37.8±1.9,15.4±1.1),b ec lin-1抑制組 VM管樣結(jié)構(gòu)數(shù)目少于其余兩組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。beclin-1抑制組干性基因(c-myc)的表達(dá)均較空白組及陰性對照組明顯下降,空白組,陰性對照組及bec lin-1抑制組基因灰度值為(7475±174.1,7433.3±150.1,3366

4、.3±109.2),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示:空白組,陰性對照組及bec lin-1抑制組侵襲細(xì)胞數(shù)目分別為(248.0±28.9,232.3±28.0及43.2±16.4), bec lin-1抑制后胃癌細(xì)胞侵襲能力顯著下降,與其余兩組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果則顯示:在饑餓誘導(dǎo)下 bec lin-1抑制組胃癌細(xì)胞增殖能力較其余兩組下降。
　　結(jié)論:自噬特異